骨质疏松症是一种全身性的骨骼疾病,临床表现为骨的含量减少、骨脆性增加、骨微观结构退化而导致其易于发生骨折的症状。骨质疏松症在发病初期一般缺乏显著的特征,这也是导致骨质疏松症经常被忽视的主要原因,随着病情的进一步发展,出现骨骼痛感、身高身长缩短、驼背弓腰、骨折甚至呼吸障碍等危急情况。现代医学认为,机体骨骼终身处于动态的、不断地吸收与形成的平衡中,骨质疏松症是一种全身性疾病,它与遗传、饮食、生活习惯、生殖以及内分泌等因素密切相关,这些因素均可能导致骨组织代谢异常。在骨骼生长期,骨的成型大于骨的分解;一旦骨分解大于骨成型时,骨量逐渐减少,易形成骨质疏松症。随着人们对骨质疏松症的认识进一步深入,骨质疏松症的作用和影响也愈加受到重视。龟鹿二仙胶,又名龟鹿二仙膏、二仙胶,它的主要组成成分为龟板胶、鹿角胶、人参和枸杞子。中药鹿角胶性甘、温、咸,中药龟板胶性甘、寒、咸,二者均入肾经、肝经。龟板胶可养阴填髓,鹿角胶亦可填筋骨,二者合用则兼顾阴阳之合配伍无偏倚,协同调肝经、肾经。龟鹿二药即所谓“二仙”。配伍中的中药人参味甘、微温、微苦,入脾、肺、心、肾经。人参的功效众多,如补气、健脾、益智、养血生津等。人参与龟鹿二胶合用可以促进精血的生成与流通。配伍中枸杞子,性平味甘,入肝、肾经,枸杞子滋补肝肾、益精养血。龟鹿二仙胶采用鹿角、龟板、人参、枸杞子配伍,可使其药效显著加强。鹿角、龟板、人参、枸杞子四药合并使用,可填补精血、巧阳并补。文献及前期研究发现,龟鹿二仙胶能够促进骨胶原合成,预防骨质疏松,本论文通过动物和细胞模型,深入探讨龟鹿二仙胶抗骨质疏松的分子机制及其靶点。第一章龟鹿二仙胶对地塞米松诱导成骨细胞损伤的影响。研究方法如下,SD大鼠饲养一周后随机分成四组,每组20只大鼠:包括空白组、骨化三醇组、龟鹿二仙胶低剂量组、龟鹿二仙胶高剂量组。除空白对照组外,其余三组按以下剂量灌胃给药:龟鹿二仙胶低剂量0.05 g·ml-1、高剂量0.1 g·ml-1,阳性对照组给药骨化三醇0.1μg·Kg-1。MC3T3-E1成骨细胞株分组为:空白组、模型组(地塞米松10-8 mol·L-1)、骨化三醇组、龟鹿二仙胶含药血清低剂量组、龟鹿二仙胶含药血清高剂量组。采用MTT检测细胞活力、细胞上清液检测超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)活性、细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平检测;用Western blot法检测Nrf-2/HO-1/NF-κB通路蛋白表达水平。研究结果发现,龟鹿二仙胶含药血清低、高剂量与骨化三醇含药血清组能显著升高成骨的活力;同时,龟鹿二仙胶含药血清低、高剂量显著升高成骨细胞上清SOD含量、降低MDA含量;降低成骨细胞上清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平;Western blot实验显示龟鹿二仙胶含药血清低、高剂量与骨化三醇含药血清组能显著升高成骨细胞Nrf-2、HO-1蛋白表达,降低p-IκB、P-NF-κB蛋白表达。因此,龟鹿二仙胶能显著地改善塞米松诱导成骨细胞的损伤,其机制可能与其与Nrf-2/HO-1/NF-κB通路作用有关。第二章研究龟鹿二仙胶对地塞米松诱导大鼠骨质疏松的影响。研究方法如下,实验动物SD大鼠随机分成五组,除空白对照组外,其余各组均每周肌注地塞米松(5 mg·kg-1)一次,连续造模12周。从第6周开始,治疗组灌胃给予骨化三醇(0.1μg·kg-1)与龟鹿二仙胶低剂量(0.5g·kg-1)、高剂量(1g·kg-1),空白与模型组给予相应体积的生理盐水,连续6周。实验结束后,测量各组大鼠第5腰椎和左股骨的骨密度(BMD)、血清磷酸酶、降钙素、雌二醇测定、血清SOD、MDA测定、血清炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平测定;HE染色观察股骨结构的病理改变,Western blot实验龟鹿二仙胶对大鼠滑膜蛋白Nrf-2、HO-1、p-IκB、P-NF-κB的作用。实验结果显示,龟鹿二仙胶能显著增加大鼠股骨骨密度;龟鹿二仙胶低、高剂量各组血清骨碱性磷酸酶水平明显降低,降钙素显著性升高,雌二醇显著性升高。龟鹿二仙胶低、高剂量与骨化三醇组能显著升高血清SOD含量、降低MDA含量,并能显著降低大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平。HE实验结果显示,龟鹿二仙胶低、高剂量与骨化三醇组有新生骨小梁的形成,骨小梁结构较模型组完整;Western blot实验显示龟鹿二仙胶低、高剂量与骨化三醇组能显著升高大鼠滑膜Nrf-2、HO-1蛋白表达,降低p-IκB、P-NF-κB蛋白表达。因此,龟鹿二仙胶能显著地改善地塞米松诱导的大鼠骨质疏松,其机制可能与Nrf-2/HO-1/NF-κB通路作用有关。综上所述,论文研究发现龟鹿二仙胶对地塞米松诱导成骨细胞损伤,和地塞米松诱导的大鼠骨质疏松有明显的改善作用,其作用机制与其抗炎、抗氧化活性相关。研究进一步发现,龟鹿二仙胶对骨质疏松的作用可能与Nrf-2/HO-1/NF-κB通路作用有关。这些研究结果将为龟鹿二仙胶防治地塞米松诱导的大鼠骨质疏松奠定理论基础。