陈化烤烟烟叶细菌群落鉴定及应用研究

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微生物的作用在烟草加工中担当着极其重要的角色,尤其是在烟叶陈化阶段。然而大部分对于烟叶陈化中微生物的研究仅停留在传统的分离和鉴定,通过高通量测序对陈化烟叶表面微生物的鉴定研究更是未见有报道。因此,本研究利用高通量测序技术,通过对陈化烤烟细菌的16S rRNA进行测序和分析,获得了不同产地陈化烤烟表面细菌的菌群结构信息,同时结合培养方法分离得到不同产地陈化烤烟上的可培养细菌若干株,并且筛选获得有产酶能力的菌株。此外,研究还通过在等级较低的陈化烟叶上添加筛选得到的菌株或者菌群,挖掘微生物在提高烟叶质量上的应用价值。具体结果如下:1,利用高通量测序技术和生物信息学手段,对来自云南昆明和河南襄县两个产地的等级为C3F陈化烤烟表面的细菌群落及其培养菌群的16S rRNA进行测序和分析。结果表明两个样品中的细菌结构类似,尤其是在优势菌群方面。两个样品细菌菌群中变形菌门(Proteobacteria)所占的比例是89.76%和91.87%,厚壁菌门(Firmucutes)所占的比例分别是6.61%和4.27%。两个菌群在多样性方面存在着差异,从昆明和襄县样品中鉴定得到的操作分类单元(Operational Taxonomic Unit)分别是281个和174个,因此,可以判断昆明样品中的细菌群落的丰富度比襄县样品更高。而在两组样品的培养群落中,随着培养时间的增加,细菌的多样性减少,优势菌群比例增大,芽孢杆菌属(Bacillus)在其中占据绝对的优势。结果显示来自不同产地的陈化烟叶的微生物有共同性,也有差异性。芽孢杆菌属在烟叶陈化过程中占据着主导地位。研究为细菌在烟叶陈化过程的作用机理研究提供依据。2,通过传统的培养和分离方法,从5个产地的烟叶中分离得到73株细菌菌落,并对其产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶能力进行筛查,其中得到产酶菌株52株。分离得到的部分菌株和来自5个产地的陈化烤烟烟叶表面的可培养微生物群分别回添到等级为B2F的烟叶上,进行人工陈化处理,再通过评吸实验来筛选出能够提高烟叶品质的增香菌株或者菌群。结果发现大部分产酶菌株能够产淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶,而只有少数菌株能够产木聚糖酶和果胶酶。有3株细菌和4个菌群能够显著地提高烟叶的评吸质量,其对于在烟草加工过程中挖掘微生物资源有重要的意义,为以微生物添加为手段的烟草加工工艺的进步研究打下基础。
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