miR-19b对大鼠H9c2心肌细胞Kir2.1表达的影响

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目的:观察miR-19b对大鼠H9c2心肌细胞生物学特性及Kir2.1表达的影响。方法:1. miRNA芯片检测房颤患者和窦性心律患者心房组织样本miRNA水平;qRT-PCR对部分差异表达的miRNA进行验证。2. PicTar和Targetscan5.2两种靶基因预测软件对差异表达的miRNA进行分析。3.构建miR-19b过表达质粒、miR-19b干扰质粒、阴性序列质粒,通过慢病毒载体感染大鼠心肌细胞H9c2;倒置荧光显微镜观察感染效率,qRT-PCR检测H9c2细胞中miR-19b mRNA表达水平。4. CCK-8检测H9c2细胞的活力。5.流式细胞术检测H9c2细胞的凋亡。6. qRT-PCR检测Kir2.1mRNA水平。7. Western blot检测Kir2.1蛋白表达水平。结果:1. miRNA芯片结果显示,房颤组织样本比窦性心律组织样本表达上调大于1.5倍的miRNA有:miR-1275、miR-718、miR-664、miR-155等16个;表达下调大于1.5倍的miRNA有:miR-19b、miR-223、miR-100、miR-33a、miR-365等10个。2. qRT-PCR验证结果显示,房颤样本中miR-19b表达下调;验证结果与芯片结果相一致。3.生物信息学分析筛选miR-19b作为目的miRNA,KCNJ2为miR-19b的潜在靶基因。4.倒置荧光显微镜观察显示,慢病毒载体成功感染H9c2细胞;qRT-PCR检测结果表明,miR-19b过表达组H9c2细胞中miR-19b表达水平显著升高,miR-19b干扰组H9c2细胞中miR-19b表达水平显著降低。5. CCK-8结果显示,与对照组相比,miR-19b过表达组与H9c2细胞活力显著降低;miR-19b干扰组H9c2细胞活力显著增强;6.流式细胞术结果显示,与对照组相比,miR-19b过表达组H9c2细胞凋亡率增加,miR-19b干扰组H9c2细胞凋亡率减少;7. qRT-PCR检测结果表明,与对照组相比,miR-19b过表达组Kir2.1mRNA表达水平降低,miR-19b干扰组Kir2.1mRNA表达水平升高。8. Western blot检测表明,房颤组织样本与窦性心律组织样本相比,Kir2.1蛋白表达水平升高。与对照组相比,miR-19b过表达组Kir2.1蛋白表达水平降低;miR-19b干扰组Kir2.1蛋白表达水平升高。结论:1. miR-19b抑制KCNJ2的转录,下调Kir2.1蛋白表达。2. miR-19b促进H9c2细胞凋亡。
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