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研究背景和目的神经病理性疼痛是一种由躯体感觉神经系统的病变损伤或疾病所引起的疼痛,流行病学研究估计神经病理性疼痛的患病率为7～10%。目前神经病理性疼痛的发生机制尚不十分清楚,针对神经病理性疼痛的治疗以稳定神经膜电位、降低突触兴奋性,抑制异位放电及对症治疗为主,阿片类镇痛药物作为临床上最强镇痛药物,其对神经病理性疼痛治疗不仅疗效不佳,没有针对性只能对症止痛,而且具有较强的耐受和成瘾性,目前的这种现状使得寻求其他直接靶向治疗神经病理性疼痛的药物成为临床亟待解决的难题。目前研究发现,神经病理性疼痛的发生和进展与神经炎症密切相关,血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA）被认为是广泛参与了炎症过程,关于VEGFA在神经炎症中的重要作用受到广泛关注,然而VEGFA在神经病理性疼痛中的作用机制尚不明确。本研究拟通过观察VEGFA对C57BL/6J小鼠疼痛行为的直接作用,以及对SNI诱导的神经病理性疼痛模型小鼠使用VEGFA抑制剂——可溶性血管内皮生长因子受体1（soluble Fms-like Tyrosine Kinase 1,sFlt1）,以及VEGFA激动剂rp VEGFA,检测SNI神经病性理疼痛小鼠机械痛阈值变化情况,以及对脊髓VEGFA和下游通路的表达变化的影响,探究VEGFA参与神经病理性疼痛的可能机制,以期为神经病理性疼痛的治疗提供新的靶点和思路。实验方法1.使用C57BL/6J小鼠建立SNI模型和假手术组,第14天取L4-6段脊髓,使用蛋白印迹法（Western Blot,WB）检测脊髓中VEGFA蛋白的表达变化情况;2.脊髓鞘内注射或足底注射rp VEGFA（小鼠VEGFA重组蛋白）,观察C57BL/6J小鼠机械痛阈和热痛阈的变化;3.建立SNI模型,使用VEGFA抑制剂sFlt1（Soluble Fms-like tyrosine kinase 1）鞘内注射以及联合使用VEGFA抑制剂（sFlt1）和激动剂（rp VEGFA）,检测小鼠行为学变化,第14天取材,使用蛋白印迹法（WB）和组织免疫荧光（Immunofluorescence,IF）检测小鼠脊髓背角蛋白表达情况;4.建立SNI模型,观察AKT激动剂能否抑制sFlt1缓解神经病理性疼痛的作用。5.观察神经病理性疼痛各组热痛阈变化情况。实验结果1.SNI模型建立成功,与假手术组比,SNI组小鼠脊髓中VEGFA表达明显增高;2.C57BL/6J小鼠鞘内注射或足底注射VEGFA重组蛋白可以使C57BL/6J小鼠的机械痛阈和热痛阈下降;2.sFlt1可以减轻SNI诱导的机械性痛觉过敏,以及降低神经炎症因子表达;与SNI组小鼠相比,sFlt1+SNI组小鼠机械缩足阈值（Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）明显升高（P<0.05）,脊髓中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量明显降低,rp VEGFA+sFlt1+SNI组小鼠脊髓中的炎性因子表达较sFlt1+SNI组明显升高,PWMT显著下降,P<0.05;（2）SNI组中升高的VEGFA、VEGFR2、p-AKT、TRPV1在小鼠sFlt1干预后明显下降,P<0.05;VEGFA+sFlt1+SNI组小鼠脊髓中这些因子的表达较sFlt1组明显升高,P<0.05;（3）免疫荧光双标结果显示,小鼠脊髓背角中VEGFA、p-AKT、TRPV1表达在sFlt1干预后明显下降,VEGFA与p-AKT以及TRPV1存在共表达且在sFlt1干预后共表达减少;4.AKT激动剂740 Y-P可以抑制sFlt1所减轻的机械性痛觉过敏;5.SNI小鼠的热痛阈没有变化,使用了rp VEGFA的小鼠热痛阈较其他组明显下降。结论1.脊髓中VEGFA参与了SNI诱导的神经病理性疼痛;2.VEGFA参与了痛觉的产生和传递;3.sFlt1可能通过抑制VEGFA,影响p-AKT/TRPV1通路减轻SNI小鼠机械痛敏和脊髓神经炎症。