巨噬细胞是机体免疫系统中的重要成分之一,巨噬细胞具有多种免疫功能,是炎性反应中主要的调节细胞,当宿主发生病原体感染后,巨噬细胞通过释放NO、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-12等增加表面分子诱导细胞免疫,杀灭病原微生物,在有效清除病原体方面起了关键的作用。但是,如果促炎反应在适当的时期没有终止,就会导致周围组织损伤。本文以抑制NO释放为衡量指标,考察了 9种双苄基异喹啉类生物碱（BBI）（莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱、粉防己碱、异粉防己碱、防己诺林碱、蝙蝠葛碱、小檗胺和千金藤素）对脂多糖（LPS）诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7活化的抑制作用,并从NF-κB信号通路和Ca2+信号通路两方面进行了机制研究。首先,采用MTT法考察了 9种双苄基异喹啉类生物碱与LPS联合应用对巨噬细胞存活率的作用,以排除药物毒性作用造成的影响。结果表明,9种生物碱（0.1-10μM）对LPS活化的巨噬细胞存活率无显著影响。此外,9种生物碱单独作用也不影响巨噬细胞的存活率。其次,采用Griess法对9种双苄基异喹啉类生物碱抑制LPS激活巨噬细胞的NO释放作用进行了检测,并计算其IC50值,结果表明,9种生物碱均能够不同程度的抑制活化的巨噬细胞释放NO,其中异莲心碱、甲基莲心碱、粉防己碱、蝙蝠葛碱的作用明显好于其他生物碱。经构效分析初步发现:①苯环上酚羟基的甲基化可使活性增强;②两个单苄基异喹啉之间头尾相连的结构使分子扭曲度提高,利于与受体结合,有助于活性的提高;③1位的手性碳原子构型引起的分子空间构型和构象对活性有较大影响。此外,荧光显微镜观察结果表明9种生物碱在10μM浓度下均可明显地抑制LPS激活的巨噬细胞形态改变。为探讨9种双苄基异喹啉类生物碱抑制LPS激活巨噬细胞NO释放的作用机制。采用RT-PCR法考察了甲基莲心碱、莲心碱和异莲心碱3种主要双苄基异喹啉类生物碱对LPS激活的巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达的影响。结果表明,这3种生物碱均能够不同程度抑制LPS激活的巨噬细胞中iNOS mRNA的表达。以上结果证明了上述双苄基异喹啉生物碱可通过抑制iNOS的转录表达进而降低LPS激活的巨噬细胞NO释放水平。应用ELISA法检测了 9种双苄基异喹啉类生物碱对LPS激活的巨噬细胞释放TNF-α水平影响,以及7种双苄基异喹啉类生物碱（除蝙蝠葛碱和盐酸小檗胺外）对LPS激活巨噬细胞释放的IL-6水平和6种双苄基异喹啉类生物碱（除蝙蝠葛碱、盐酸小檗胺和千金藤素外）对LPS激活巨噬细胞释放IL-1β水平的影响。结果表明,上述双苄基异喹啉生物碱对LPS激活RAW264.7细胞TNF-α、IL-6以及IL-1β的释放增高均具有显著的抑制作用。在以RT-PCR法考察IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的变化过程中发现,3种BBI生物碱,甲基莲心碱、莲心碱和异莲心碱,,均能够不同程度抑制LPS激活的巨噬细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,进一步证明了其具有抗巨噬细胞过度活化的作用。为了研究钙离子信号通路在双苄基异喹啉类生物碱抗巨噬细胞活化过程中所起作用,应用计算机分子对接的方法研究了双苄基异喹啉类生物碱与钙调蛋白的结合能力。将9种双苄基异喹啉类化合物以及TFP、W-7（两种典型钙调蛋白抑制剂）分别与钙调蛋白进行了对接,并对对接结果评分排序,结果表明异莲心碱、莲心碱、蝙蝠葛碱和甲基莲心碱均能够与钙调蛋白进行较好的结合,其中,异莲心碱与钙调蛋白的对接结果要好于阳性对照W-7与钙调蛋白的对接结果,更好于其它双苄基异喹啉类生物碱,与双苄基异喹啉类生物碱抑制活化巨噬细胞NO释放的IC50计算结果一致。此结果说明双苄基异喹啉类生物碱的抗巨噬细胞活化作用与其钙离子拮抗作用之间具有一定的相关性。综上所述,异莲心碱等双苄基异喹啉类生物碱可通过抑制细胞内iNOS mRNA表达而抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放,同时还可以抑制活化巨噬细胞内 IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA 的转录表达以及 IL-1β、TNF-α、IL-6 的释放,上述抑制作用可能与双苄基异喹啉类生物碱和钙调蛋白结合作用有关,具体作用机制有待进一步研究。异莲心碱等双苄基异喹啉类生物碱可能对巨噬细胞过度激活相关的外周炎症具有潜在的防治作用。