恶性肿瘤是人类死亡的第二大主要因素，而且有逐渐上升的趋势，在有些发达国家，恶性肿瘤甚至已成为危害人类生命的头号杀手。其中，消化系统的恶性肿瘤占全身恶性肿瘤的60％～70％，胃癌和结直肠癌是常见恶性肿瘤。尽管胃肠肿瘤在手术、化疗、放疗、免疫和生物等各种治疗方法上有了很大提高，但遗憾的是仍然有30％～50％患者出现复发和转移。临床早期胃结肠癌可以通过手术等有效治疗达到根治，但大部分患者就诊时，肿瘤已发生全身微转移，治疗后又缺乏一个有效的手段予以评估疗效，检控病情的发展，直至出现临床转移，这是目前导致治疗失败的主要原因。所以如何预防和检测发现微转移是成为目前肿瘤研究的一个热点。为此，人们不断地寻找着一种监测评估微转移和病情发展的特异性强敏感性高的指标。 微转移是指恶性肿瘤在发展过程中，播散并存活于血循环、淋巴道、骨髓及各器官组织中的尚未形成转移结节的肿瘤细胞，无任何临床表现，常规检查方法如影像学和病理学检查等难以发现。在 浙江大学博士学位论文血液中，常规方法无法检测出肿瘤细胞，故能检出血循环中的肿瘤细胞均属微转移。 角蛋白19、20（CK19、CK20）和癌胚抗原CEA。表达非常局限在上皮细胞。“正常淋巴组织、血液组织、骨髓组织中无表达或低表达，且在肿瘤侵袭、转移、扩散到其它组织器官时始终保持稳定。在非上皮组织中检测到它们则可以提示存在上皮肿瘤细胞的转移。病理学的连续切片和兔疫学等检测可以发现在淋巴结、骨髓和血道的微转移细胞，但敏感性较低。而基因检测具有高度敏感性、特异性，可准确检测 ig组织或 lin！液体中的 1个癌细胞，被认为是目前检测微转移的最有效方法。 mRNA作为检测远处转移的标志物较蛋白质为好。原因有二，其一，＊NA在细胞外环境中极不稳定，易降解：其二，破碎的恶性肿瘤细胞不具备完整的RNA。因此，检测到mRNA便意味着表达此种mRNA的细胞存在。对于胃肠道恶性肿瘤患者而言，一旦外周血中有肿瘤组织特异性标志物mRNA的表达．就意味着癌细胞可能播散人血液循环，应视为形成远处转移及术后复发的高危患者。目前国内外基础和临床研究常将 CK！9、CK20、CEA等 mRNA作为血液循环中消化道癌细胞的靶基因．运用逆转录聚合酶链反应（RT一PCR），可以检测外周血中的肿瘤细胞，从而筛选出有复发及远处转移倾向的高危患者。近10年来，随着生物学技术的发展，新的检测方法不断地应用于临床。RT－P C R 技术可以检测出标本中目的基因mRNA，是一种敏感性极高的检测方法。 用于临床基因诊断常规PCR检测有许多局限性。一是不能准确定量；二是由于灵敏度高，操作步骤繁琐，易交叉污染，产生假阳性。三是外周血中非法转录和假基因的低表达影响检测结果。为了 第2页 浙江大学博士学位论文克服以上缺陷，人们采用了杂交法、竞争法、酶联法及尿昔酶降解法等许多办法，但均不尽如人意，直到最近荧光定量PCR的出现，才解决了上述问题。目前，国内应用此技术对肿瘤临床检测刚起步，未见大宗报道。 胃肠道恶性肿瘤的浸润与肿瘤的转移是多步骤、多阶段，多因素综合作用的复杂过程，突破基底膜是肿瘤细胞进行浸润和转移的最初和最关键阶段。细胞外基质的降解是突破基底膜的必须环节。肿瘤细胞必须具备降解细胞外基质的能力，才能向周围组织浸润，并侵入血管、淋巴管而向远处转移。其中金属蛋白酶（matrixmetalloproteinasesMMP）和尿激酶纤溶酶原激活剂（urokinase－typeplasmlnogen activator，uPA）等蛋白酶类是肿 瘤细胞作用于基底膜的两种重要的蛋白酶。 本研究通过对171例的胃肠道肿瘤外周血，术中肿瘤区域血和腹腔冲洗液的角蛋白 19、20（CK19、CK20）和癌胚抗原 CEA的 mRNA的定量测定。探讨它们与病理分期等临床因素之间的关系，并研究它们在手术前后及在病情发展中的变化，试图寻找出它们在微转移中的作用和地位。研究 M M P和 u PA在肿瘤组织和远癌组织间定量表达与肿瘤侵袭和转移之间的关系，并探讨 M M P及 11 PA的表达与血循环中微转移之间的联系。第一部分：消化道肿瘤临床病理因素之间相关性的探讨 病理分期至今仍是判断肿瘤预后和决定肿瘤治疗方案的主要依据。我们对77例胃癌和94例结直肠癌患者进行分析，观察肿瘤的大体类型（根据生长方式分为浸润型和局限型）、肿瘤大小、浸润深度和转移淋巴结数目等因素之间的关系。经过多因素相关性分析后， 第3页 浙江大学博士学位论文除了浸润深度和淋巴结转移因素外，发现大体类型、分化程度、肿瘤最大径、也与病理分期存在相关性。浸润型生长、肿瘤最长径35厘米的肿瘤相对病理分期越晚。 小结：胃癌浸润深度?