论文部分内容阅读
本文对粒毛盘菌产胞外多酚的发酵条件、纯化工艺、理化特征及生物活性进行了研究,主要结果如下：通过原生质体诱变获得一株高产粒毛盘菌胞外多酚突变株YMU50,其胞外多酚产量相比出发菌株提高了71.11%,生物量相比出发菌株提高了83.47%。对突变株YMU50进行发酵条件优化得到最优发酵条件为：蔗糖20g/L,蛋白胨5g/L,氯化镁0.81g/L,酪氨酸0.01g/L, pH6。研究了不同浓度硝普钠(SNP)对粒毛盘菌YMU50胞外多酚(LTEP)积累及抗氧化防御系统的影响。结果表明：低浓度SNP促进粒毛盘菌菌丝体的生长,有利于生物量的积累,能够提高粒毛盘菌YMU50PAL的活性,促进LTEP的积累。高浓度SNP对粒毛盘菌生长则表现出显著的抑制作用,不利于生物量和LTEP的积累。此外,低浓度SNP能显著提高粒毛盘菌YMU50菌丝体内过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性,降低其体内H2O2和MDA的含量,能够诱导激活粒毛盘菌YMU50的抗氧化防御系统。而高浓度SNP则导致粒毛盘菌YMU50菌丝体内CAT、SOD、APX活性降低,H2O2和MDA含量升高,对其抗氧化防御系统有损伤作用。通过筛选得到80-100目聚酰胺树脂对LTEP的静态吸附性能与解析效果最好,利用80-100目聚酰胺树脂对LTEP进行纯化。单因素试验结果表明最优吸附条件为：上样浓度2mg/mL,上样pH4,上样速率1BV/h；最优解析条件为：乙醇浓度20%,洗脱液流速1BV/h,乙醇用量500mL,洗脱液pH8.5。采用Box-Behnken组合设计优化解析条件,得到最优解析条件为：乙醇浓度18%,洗脱液流速0.98BV/h,乙醇用量600mL,洗脱液pH9。在最优吸附与解析条件下得到的LTEP的纯度是75.45%。对经过聚酰胺树脂纯化过的LTEP进行UV、IR和GC-MS分析。结果表明：UV光谱显示其在270nm和340nm处有最大吸收峰,表现出典型的酚类特征；IR光谱显示其3354.360cm-1和1048.762cm-1含有酚类的特征吸收峰；GC-MS分析结果表明LTEP中含有没食子酸、3,3’,4’,5,7-五羟基黄酮、2-溴-4-羟基-5-甲氧基苯基乙酸、3-溴-5-乙氧基-4-羟基苯甲醛等酚类物质。通过测定LTEP对O2-·、DPPH、·OH和NO2-的清除作用来综合评价LTEP的抗氧化活性,并考察LTEP的抑菌活性,结果表明：当LTEP浓度为2mg/mL时,其对O2-·、DPPH、·OH和NO2-的清除率分别为76.43%、72.70%、55.56%、59.40%。结果显示粒毛盘菌多酚具有较强的抗氧化活性。LTEP对金黄色葡萄球菌抑菌效果最强,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、酿酒酵母、沙门氏菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.05,0.1,0.1,0.2mg/mL。