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[目的]
从小毛莨的块根猫爪草中提取多糖,并研究猫爪草多糖(Polysaccharide ofRadix Ranunculi Ternati,RTP)对人肺癌A549细胞及人鼻咽癌CNE-2Z细胞的凋亡作用及其作用机制,以及猫爪草多糖的抗氧化活性,探讨其在生物医药领域中应用的可能性,为进一步深入研究猫爪草多糖的抗肿瘤、抗氧化作用和临床应用提供理论及实验依据。
[方法]
1.应用MTT法研究RTP体外对人肺癌A549细胞及人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响。
2.应用Hoechst荧光染色法、碘化丙啶(Propidium iodide,PI)单染法分别检测RTP对人肺癌A549细胞形态及细胞周期变化的影响。
3.通过RT-PCR方法检测RTP对人肺癌A549细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2、Bax基因mRNA表达水平的影响。
4.建立小鼠急性肝损伤模型,研究RTP对肝损伤小鼠血清ALT、AST,脏器T-AOC、SOD活性及MDA含量和肝脏病理组织的影响。
5.建立小鼠D-半乳糖(D-galactose,D-gal)亚急性衰老模型,研究RTP对D-gal衰老小鼠脾指数、胸腺指数和脾细胞细胞周期,肝脏IL-2、TNF-α含量,脏器T-AOC、SOD活性及MDA含量,血清NO、NOS的影响。
[结果]
1.RTP在100μg/ml～800μg/ml浓度范围内对人肺癌A549细胞及人鼻咽癌CNE-2Z细胞均有不同程度的增殖抑制作用,其中对人肺癌A549细胞的增殖抑制较明显,400μg/ml的RTP作用A549细胞72h的抑制率达66.57％。
2.RTP各剂量组100μg/ml～800μg/ml浓度范围内作用于人肺癌A549细胞48h,能够不同程度的诱导A549细胞凋亡,对细胞周期的影响表现为G0/G1期阻滞。
3.RTP在100μg/ml～800pg,ml浓度范围内作用于人肺癌A549细胞48h,能够增强A549细胞相关基因p53和Bax基因mRNA水平的表达,降低Bcl-2基因的mRNA的表达水平,在浓度为400μg/ml时,作用最强。
4.RTP各剂量组(100mg/ml～400mg/ml)均能降低CCl4所致小鼠急性肝损伤肝体指数及血清ALT、AST活性,提高肝组织、肾组织、心组织匀浆T-AOC能力、SOD活力,降低MDA含量,同时不同程度减轻肝组织损伤的程度。可能与其抗氧化作用有关。
5.RTP各剂量组(100mg/ml～400mg/ml)可提高肝组织、肾组织、心组织匀浆T-AOC能力、SOD活力,降低其MDA含量,对血清中NO、NOS含量没影响,可提高D-gal衰老模型小鼠胸腺指数、脾指数,使衰老模型小鼠脾细胞细胞周期向S期和G2/M期发生转换,促进小鼠体内细胞因子IL-2和TNF-α的分泌。
[结论]
1.猫爪草多糖可能通过直接抑制A549细胞和CNE-2Z细胞增殖,阻滞A549细胞于G0/G1期,上调p53和Bax基因的mRNA表达水平,降低Bcl-2基因的mRNA的表达水平从而诱导A549细胞凋亡等机制抗肿瘤。
2.猫爪草多糖对急性肝损伤模型小鼠有较强的肝脏保护作用,与其抗氧化作用有关。
3.猫爪草多糖可延缓D-gal衰老模型小鼠组织及细胞结构及功能衰退,增强衰老小鼠免疫功能,提高体内抗氧化系统酶活性,较好地维护D-gal衰老模型小鼠体内氧化/抗氧化平衡状态。