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背景及目的:糖尿病肾病(DN)发生发展与肾脏微血管异常和慢性缺氧密切相关,而肾脏固有细胞凋亡在其进程中扮演重要作用。前期实验已证实促血管生成素-1(Ang-1)和抑制低氧诱导因子(HIF)降解可减轻糖尿病大鼠肾脏血管生成和缺氧相关因子异常表达,改善糖尿病肾脏微血管病变和缺氧状态。本研究旨在从细胞凋亡角度评估Ang-1、含羞草素(L-mimosine,HIF降解抑制剂)对糖尿病肾脏保护性作用。方法:构建Ang-1基因重组腺病毒载体(Ad-Ang-1)。采用腹腔一次性注射链脲菌素诱导SD大鼠糖尿病模型。设置正常对照组(N组)、DN组(D组)、空载腺病毒组(K组)、Ang-1干预组(A组)、L-mimosine干预组(L组)及Ang-1+L-mimosine联合干预组(AL组)。成模8W后,K组大鼠经阴茎静脉注射空白腺病毒载体(3×108 pfu/只),A组大鼠经阴茎静脉注射Ad-Ang-1(3×108 pfu/只),L组大鼠经腹腔注射L-mimosine(50mg/kg,隔日一次),AL组联用Ad-Ang-1及L-mimosine。在12W、16W末收集大鼠血、尿标本常规生化检测,同时处死大鼠,取出肾脏组织,HE及PAS染色观察肾脏病理,Western blot测定凋亡相关蛋白(cleaved CASP3、CASP3、BAX、BCL-2)的表达变化,TUNEL法观察肾脏固有细胞凋亡情况。结果:1.血糖、24h尿蛋白:5个糖尿病模型组血糖、24h尿蛋白均显著高于N组(P<0.05),其中AL、L组24h尿蛋白低于D、A组(P<0.05)。2.血肌酐、尿素:5个糖尿病模型组血肌酐、尿素水平较N组不同程度上升,且3个药物干预组之间无明显统计学差异(P>0.05),其中血肌酐水平与D组亦无明显差异,而12w时血尿素水平却较D组升高(P<0.01)。3.肾脏病理:5个糖尿病模型组可见不同程度的肾小球变形增大、系膜基质积聚、细胞总数增多、部分球囊扩张、肾小管管腔扩张及肾小管间质炎症细胞浸润,3个药物干预组病理改变相对减轻。4.肾组织细胞凋亡相关蛋白:(1)与N组相比,5个糖尿病模型组cleaved CASP3蛋白表达均明显上调(P<0.01),而CASP3蛋白表达均明显下调(P<0.01)。3个药物干预组cleaved CASP3蛋白表达显著低于D组(P<0.01),而CASP3蛋白表达显著高于D组(P<0.01),且3个药物干预组间cleaved CASP3、CASP3蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。(2)5个糖尿病模型组BAX蛋白表达较N组均明显上调(P<0.01),其中3个药物干预组BAX蛋白表达显著低于D组(P<0.01),且3个药物干预组间BAX蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。(3)5个糖尿病模型组BCL-2蛋白表达较N组均显著下调(P<0.05),其中3个药物干预组BCL-2蛋白表达显著高于D组(P<0.05),且3个药物干预组间BCL-2蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。(4)5个糖尿病模型组BAX/BCL-2比值较N组均明显上调(P<0.01),其中3个药物干预组BAX/BCL-2比值低于D组(P<0.01),且3个药物干预组间BAX/BCL-2比值无统计学差异(P>0.05)。5.肾组织细胞凋亡率:细胞凋亡主要表现在肾小管上皮细胞,其次系膜细胞;5个糖尿病模型组细胞凋亡率较N组均明显升高(P<0.01),其中3个药物干预组细胞凋亡率显著低于D组(P<0.01),且3个药物干预组间细胞凋亡率无统计学差异(P>0.05)。6.Pearson相关性分析:Cleaved CASP3、BAX的表达及BAX/BCL-2比值与肾脏固有细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.963、0.927、0.962,P<0.01),而CASP3、BCL-2的表达与肾脏固有细胞凋亡率呈显著负相关(r=-0.967、-0.940,P<0.01)。结论:Ang-1和或L-mimosine可降低糖尿病大鼠肾脏固有细胞凋亡,且与改善细胞凋亡相关蛋白的表达相关。Ang-1和L-mimosine单用或联用无明显差异。