本研究的目的是克隆牛种布鲁氏菌SP41基因并构建其原核表达载体，使其在大肠杆菌中高效表达，用表达的融合蛋白为抗原作为抗原制备抗血清，为进一步制备布鲁氏菌病ELISA检测试剂盒打基础。以布鲁氏菌A19疫苗株基因组DNA为模板，利用设计的一对特异性引物对牛种布鲁氏菌SP41基因进行PCR扩增，得到了一条完整的基因，大小为1302bp，然后通过T-A克隆将其连接至pEASY-T3载体上，经PCR和酶切鉴定表明克隆载体构建成功。将构建好的克隆载体进行测序，测序结果证明克隆的基因片段全长1302个核苷酸，编码433个氨基酸的成熟多肽，与已报道的与布鲁氏菌2308、A-13334、S19、9-941序列的核苷酸同源性为100%，与ATCC、CCM4915、M28、M5-90、NI同源性均为99.8%，且其与9-941编码氨基酸序列完全一致。将该基因克隆到原核表达载体pET-32a中，经酶切、PCR鉴定和测序分析，表明重组表达载体pET-32a(+)-SP41构建成功，将此重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，用IPTG进行诱导，进行SDS-PAGE分析，结果表明，该基因可以在大肠杆菌中高效表达，表达产物为分子量约66kDa的融合蛋白，与预期大小符合。通过对诱导条件的摸索发现，IPTG浓度对蛋白表达的影响不大，而37℃，诱导6h，表达效果最好。Western-blotting结果显示，所得重组蛋白具有良好的免疫源性。利用Ni-NTA柱进行纯化，得到了纯化目的蛋白。将纯化的目的蛋白免疫健康雄性家兔，经过4轮免疫过程，用间接ELISA方法测的抗血清抗体效价达到1：51200。以布鲁氏菌SP41重组蛋白为抗原，用临床布鲁氏菌病阳性牛血清为一抗，山羊抗牛IgG为二抗，进行ELISA检测，探索了SP41蛋白作为诊断蛋白的可行性。