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10—去乙酰巴卡亭Ⅲ(10—deacetyl baccatinⅢ)是从红豆杉属植物(Taxus)短枝叶中分离、提取得到的一种紫杉烷二萜类化合物,是目前临床和科学研究用紫杉醇和多烯紫杉醇化学半合成的关键原料,在缓解紫杉醇资源短缺问题中起着不可替代的作用。
云南红豆杉(Taxusyunnanensis)是分布在我国的主要红豆杉树种,也是我国现有几种红豆杉植物中紫杉醇和10—去乙酰巴卡亭Ⅲ(10—DABⅢ)含量较高的树种。本论文研究了云南红豆杉生长点细胞悬浮培养系的建立方法,细胞培养物中10—DABⅢ的高效液相测定方法,细胞培养物中提取、分离10—DABⅢ的方法,对云南红豆杉细胞培养生产10—DABⅢ的培养基、培养条件、培养基主要成分、前体和稀土诱导子进行了系统的研究;并探讨了云南红豆杉生长过程中不同部位10—DABⅢ含量变化情况。主要得到以下结论:
1、以云南红豆杉生长点为外植体诱导愈伤组织,愈伤组织经过继代培养、驯化,建立了性质均一、性状稳定的云南红豆杉细胞株。
2、建立了高效液相法测定云南红豆杉细胞培养物中10—DABⅢ含量的方法,该方法操作简便,灵敏度高,重现性好,专属性强,同时该方法还可以用于红豆杉枝叶中10—DABⅢ含量的检测。
3、从云南红豆杉细胞培养物中提取、分离得到10—DABⅢ,并用薄层层析、高效液相法、核磁共振氢谱和碳谱对结构进行了鉴定,证明从细胞培养物中提取、分离得到的10—DABⅢ与从天然红豆杉植物中得到的10—DABⅢ为同一化合物。
4、筛选出能够促进10—DABⅢ合成与释放的培养基、培养条件;从B5培养基主要成分氯化钙、磷酸二氢钠、硫酸铜、硫酸铵和硝酸钾中筛选出能够促进10—DABⅢ合成与释放的适宜浓度;从乙酸钠、苯甲酸钠两种前体和硝酸铈、硝酸铈铵、硝酸镧三种稀土诱导子中筛选出能够促进10—DABⅢ合成与释放的适宜浓度。
5、初步探明了云南红豆杉生长过程中不同部位10—DABⅢ含量的变化情况,休眠芽分化期是10—DABⅢ在枝叶中合成与积累的关键时期。
另外,本论文还对丽江獐牙菜(S. delavayi)氯仿和正丁醇萃取物进行了系统的化学成分研究,从中分离到14个化合物,鉴定了7个化合物。
综述了红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究进展。