烟粉虱Bemisia tabaci是半翅目粉虱科的世界性农业害虫,通过刺吸植物汁液以及传播病毒严重危害我国农作物。目前对烟粉虱的防治主要依赖于化学防治,噻虫嗪作为一种第二代新烟碱类杀虫剂产品,具有独特结构和高效的杀虫活性,目前是防治烟粉虱的重要药剂。随着药剂的长期大量使用,有关害虫对于新烟碱类药剂抗药性的报道日渐增加。关于其抗性机制的研究表明,其抗性产生的机制主要集中在靶标抗性与解毒酶抗性,其中解毒酶抗性更为普遍,并且多集中在细胞色素P450对药物的代谢抗性。本研究的主要内容有:CYP6DV5基因全长克隆,CYP6DV5时空表达分析,通过荧光定量PCR和RNAi技术分析该基因是否参与烟粉虱噻虫嗪抗性的形成。通过在果蝇体内过量表达CYP6DV5基因,验证该基因对噻虫嗪的抗性功能。实验结果如下:基因克隆序列分析结果显示,CYP6DV5基因包含一个1305bp的开放阅读框,编码435个氨基酸,具有典型的P450保守结构域。荧光定量PCR结果表明,CYP6DV5基因在噻虫嗪抗性与敏感种群间差异表达,在抗性THQR种群中显著高表达,是THQS敏感种群的2.96倍。RNA干扰实验中,通过对对照与实验组分别饲喂含ds GFP与ds CYP6DV5的饲喂液48h,q PCR结果显示与ds GFP饲喂组相比,ds CYP6DV5饲喂组中的CYP6DV5基因被显著敲低了29.9%。随后的生测结果显示,CYP6DV5的沉默导致了在敲低组与ds GFP组相比,在多个浓度与时间点有更高的死亡率。通过低量药剂饲喂抗性烟粉虱诱导其抗性基因的表达,测定CYP6DV5基因表达量的随饲喂时间的变化结果显示,CYP6DV5的表达量与饲喂前相比随饲喂的时间持续显著升高至2.37倍。将CYP6DV5基因转入果蝇体内过量表达后,转入成功的果蝇其噻虫嗪抗性水平得到了显著增高。