抗Ⅱ型单纯疱疹病毒天然小分子化合物的发现及作用机理研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangxintju4
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单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)为世界最常见的病原体之一,能够诱发人类皮肤类疾病。人类是HSV感染的唯一自然宿主。HSV主要感染宿主的脸部和生殖器的皮肤以及黏膜。按照血清型的差异,我们把HSV分为Ⅰ型和Ⅱ型(HSV-1和HSV-2或HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ)。经调查报道,感染HSV-Ⅱ可以引起生殖疱疹其感染大大的促进了艾滋病(human immunodeficiency virus,HIV)的传播。HSV有潜伏性和裂解性感染两种入侵方式,可以使患者引起反复的感染。目前,市面上还未出现预防HSV的疫苗,而临床上多数是用一些核苷类似物的药物来治疗HSV感染,但是这些药物却有大量的缺点,如靶点数少,生物利用率低,药物的半衰期小以及副作用。此外,其最主要的弊端是不能阻滞潜伏感染和减少复发次数,而且这类药物根本不能抑制病毒突变株的感染。因此寻找作用机制不同于阿昔洛韦等核苷类似物、作用广泛、毒副作用小、安全可靠的抗HSV药物十分重要。天然产物遍及于自然界中的各个方面,特别是植物和常用中药中提取的物质已经成为筛选抗病毒药物的宝库。据报道,如今对天然产物尤其是植物萃取物的抗病毒活性研究有很多。本论文的目的是从中国常见的中草药和植物的提取物中筛选出具有抗HSV-Ⅱ病毒活性作用的化合物,再进一步的探索一类具有抗HSV活性的小分子化合物,并研究其抗病毒的作用机制,为了能够更高效和合理的研发和使用天然产物作为抗HSV-Ⅱ小分子化合物给予了一定的建议。在前期工作中我们从中国常见的600种传统中草药中提取了643种单体小分子化合物包括:香豆素、挥发油、甾体、苯丙素、萜、苷、香豆素、糖、氨基酸等12大类。为抗病毒药物筛选提供了宝贵的资源和夯实的基础。首先我们通过用显微镜观察初步筛选我们得到萜类、香豆素类、黄铜类、苷类、生物碱和挥发油等15个具有抗病毒作用的小分子天然化合物。再通过CCK-8、考马斯亮蓝染色法进一步筛选确定了断血流皂苷A(醉鱼草皂苷Ⅳb)、20(s)原人参二醇、秦皮素、马兜铃酸A、秦皮乙素有显著抑制HSV-Ⅱ感染活性的小分子化合物,其半数抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC50)均在50u M以下。此外,我们又进一步的对15个香豆素类的化合物进行抗病毒筛选,确定了6个具有抑制HSV-Ⅱ病毒活性的化合物包括秦皮素(7,8-二羟基-6-甲氧基香豆素)、6-甲基香豆素、秦皮乙素(6,7-二羟基香豆素)、瑞香素(7,8-二羟基香豆素)、6,7-二羟基-4-甲基香豆素、7,8-二羟基-4-甲基香豆素。通过计算其IC50都在50u M以下。通过对比发现,香豆素化合物的7,8位的羟基有可能是香豆素类化合物抗HSV-Ⅱ活性的关键基团。在随后的研究中,我们使用流式细胞仪测定细胞周期,发现正常的vero细胞被HSV-Ⅱ病毒作用10小时后细胞周期发生变化,产生S期阻滞现象,但是在有秦皮素保护下,细胞周期未发生S期阻滞,与正常细胞周期相同。通过western blot检测细胞周期相关蛋白,再次得到确定。综上所述,本文不仅为小分子化合物抗单纯疱疹病毒结构的改造以及相关药物的开发提供宝贵的建议,而且也为临床正确使用香豆素化合物及其新药开发给予了有益建议。
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