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肺癌发病率逐年增高，死亡率居高不下是每个呼吸科医生面临的严峻问题。全反式维甲酸（All-trans retinoic acid,ATRA）是天然维生素A代谢产物,无论是在正常细胞还是在肿瘤细胞的增殖、生长、分化中发挥重要调节作用。自ATRA用于治疗急性早幼粒细胞白血病，取得了令人鼓舞的临床效果。全反式维甲酸不仅能维持正常上皮细胞的生长和分化，而且能对肿瘤细胞终末期进行诱导分化，逆转其恶型性。全反式维甲酸可以通过抑制肿瘤细胞的周期因素及相关蛋白的调节使肿瘤细胞周期的进程抑制，结果加快了肿瘤细胞的分化，使肿瘤细胞的增殖受到抑制，导致肿瘤细胞的凋亡[1]。近年来已经研究证实了ATRA在多种肿瘤如膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤以及皮肤癌等方面取得了可喜的治疗潜力。研究表明全反式维甲酸能促进U87胶质瘤干细胞分化，增加其子代细胞中GFAP阳性细胞的比率，并能对细胞的增殖起到明显的抑制作用[2]。铂类联合第三代化疗药物如紫杉醇、吉西他滨、伊立替康的化疗方案是非小细胞肺癌的标准一线方案，研究称铂类药物与其他药物联合化疗可显著控制患者症状，延长中位生存期，改善其生活质量。治疗肿瘤的方法有许多种，诱导肿瘤细胞的凋亡是其中重要的途径之一，bcl-2家族是控制凋亡的重要基因，而bcl-2和bax基因是属于bcl-2家族的，bcl-2在大多数细胞中使细胞凋亡受到抑制，而bax与其功能相反，促进细胞的凋亡[3].研究表明应用ATRA和顺铂处理A549细胞后，ATRA主要作用在G1期和S期，G1期制造产生rRNA、mRNA、tRNA及核蛋白体，S期是细胞DNA合成期，G1和S期比例减少，导致A549细胞周期阻滞，DNA合成发生障碍，进而抑制肺癌细胞的生长、代谢、增殖等过程，最后导致细胞凋亡[4]。但全反式维甲酸和顺铂联合作用于裸鼠肺腺癌A549细胞移植瘤的报道很少，而且全反式维甲酸和顺铂对肺癌细胞凋亡因子bax和bcl-2的作用，这些都值得去探索和研究。本实验拟通过ATRA联合顺铂（cisplatin,DDP）作用于肺腺癌A549细胞株的裸鼠移植瘤，探讨其对肺癌细胞增殖、凋亡的影响，同时检测不同药物干预后A549细胞移植瘤bcl-2及bax基因的表达情况，为全反式维甲酸应用于肺癌治疗提供理论依据。目的：通过动物体内实验，探讨全反式维甲酸联合顺铂对肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤的作用及相关机制的研究。方法：1．细胞培养：培养肺癌A549细胞。2．建立肺腺癌A549细胞移植瘤动物模型，注意观察裸鼠的精神状况、皮肤光泽、活动度、饮食、饮水情况，并称体重。3．动物分组与给药，裸鼠接种A549细胞后成瘤裸鼠随机分为4组，每组6只。随机分为对照组、ATRA组、顺铂组、ATRA+顺铂组，共给药6次。观察裸鼠一般情况。4．采用苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色法观察化学药物治疗后裸鼠移植瘤组织的病理学变化特点。5．采用免疫组织化学方法检测化学药物治疗后裸鼠移植瘤组织蛋白bcl-2蛋白和bax蛋白的表达情况.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TdT-Mediated dUTP-Biotin Nick End Labeling，TUNEL）染色法观察移植瘤细胞凋亡情况,细胞核被染为棕黄色，使用光学显微镜，在高倍镜下任选10个视野，每个视野计数100个细胞，得出凋亡指数。凋亡指数为毎计数为1000个肿瘤细胞中凋亡细胞所占的比例.结果：1．接种后6-7d，肉眼可见实体瘤，为不规则形状。移植瘤成瘤率：接种7-15d后，共28只裸鼠，有24只裸鼠背侧形成肿瘤，接种成瘤率为85.7%。随着时间的推移，对照组裸鼠进食及活动明显减少，肿瘤生长速度较快；ATRA＋顺铂组进食、活动基本正常，肿瘤生长较缓慢；ATRA组和顺铂组裸鼠状态及肿瘤生长情况介于对照组和联合用药组之间。2．与对照组比较，ATRA组、顺铂组以及ATRA+顺铂组移植瘤体积、重量明显下降，其中，ATRA+顺铂组下降幅度最大。方差分析比较显示，ATRA组、顺铂组和联合用药组肿瘤生长较对照组明显缓慢（P<0.05）;而联合用药组抑瘤率较ATRA组、顺铂组明显升高（P<0.05）。3．ATRA组、顺铂组及ATRA+顺铂组移植瘤细胞坏死、凋亡较对照组显著增加；ATRA+顺铂组细胞坏死、凋亡明显多于ATRA组与顺铂组。4．免疫组化检测全反式维甲酸和顺铂作用于裸鼠移植瘤组织，促进bax基因表达上调，抑制bcl-2基因表达下调，配对资料的关联性分析得出，肺癌组织中bcl-2基因和bax基因的表达存在关联性，且为负相关；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记染色法观察移植瘤细胞凋亡情况,通过直相关分析得出，bax与凋亡指数呈正相关（相关系数为r=0.578,p=0.000）;bcl-2与凋亡指数呈负相关(相关系数r=-0.772,p=0.000)，bcl-2基因抑制细胞的凋亡，bax基因促进细胞的凋亡。结论：1．全反式维甲酸与顺铂均能抑制肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长，促进移植瘤细胞凋亡，二者联合作用效果更明显。2．全反式维甲酸和顺铂作用于裸鼠移植瘤均能抑制肿瘤的生长，可能促进bax基因表达上调和抑制bcl-2基因表达下调，bcl-2基因抑制细胞的凋亡，bax基因促进细胞的凋亡。