炮制对五味子中活性成分的影响及其测定方法的研究

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五味子(Schisandrachinensis)做为传统中药已经应用千年的历史了,主要的活性成分是木脂素类和三萜类化合物,具有明显的保肝,抗肿瘤,抗病毒的药理作用。不同的炮制方法会改变化学成分和药理作用,木脂素和三萜类是五味子中的主要活性成分,而同时测定木脂素和三萜类鲜为研究。本文采用正反相硅胶柱色谱法、SephadexLH-20柱色谱法、制备高效液相色谱法、制备薄层色谱法等对五味子石油醚、乙酸乙酯萃取物进行了分离纯化,并对分离得到的单体化合物用1H-NMR、ESI-MS等方法进行结构鉴定。本实验采用清炒、清蒸、蜜蒸、酒蒸、醋蒸对五味子进行炮制,通过抗氧化活性实验考察炮制品的活性,并用HPLC建立了一种同时测定木脂素和三萜类成分含量的方法,对比了不同炮制品方法对主要成分含量和抗氧化的影响并研究了主要单体化合物的抗癌活性。从五味子石油醚萃取物分离得到8个化合物,鉴定出7个化合物,分别是d-表加巴辛(1)、安五脂素(2)、machilinG(3)、襄五脂素(4)、表安五酸(5)、谷甾醇(7)、五味子甲素(16)。从五味子乙酸乙酯萃取层分离得到8个化合物,鉴定了其中的7个化合物,它们分别是五味子醇甲(8)、5-羟甲基-2-糠醛(9)、原儿茶酸(10)、胡萝卜苷(11)、柠檬酸-1-甲酯(12)、柠檬酸二甲酯(13),柠檬酸(14)。其他单体化合物正在鉴定中。通过HPLC法对不同炮制方法的五味子进行有效成分的含量测定,并考察了有效成分与抗氧化活性的线性关系。不同的炮制方法能够改变五味子的活性成分含量和抗氧化活性。其中清炒五味子的总木脂素的增加最为明显,清除自由基活性(DPPH)的半数抑制率为0.42mg/ml,而蜜制的含量最少。生品和清炒中的安五脂素的含量明显要高于其它炮制方法,而表加巴辛的含量是酒蒸,醋蒸,蜜蒸五味子中的含量高.五味子经过清炒后,表加巴辛,安五脂素,安五酸的含量有了明显的增加,而酒蒸会使襄五脂素的含量有所减少。本文研究为炮制五味子的质量控制有重要的意义。
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