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目的卵巢癌深居盆腔、起病隐匿、易转移、预后差等特点,是女性生殖系统肿瘤中致死率最高的恶性肿瘤。卵巢癌的病因至今尚不明了,治疗一直是个棘手的问题。前期研究发现TMEM14A在卵巢癌中高表达,但是TMEM14A在卵巢癌中的作用机制显有报道。本文旨在探讨TMEM14A在卵巢癌发生及转移作用机制,以期寻找卵巢癌可靠诊断指标和治疗新靶点。方法1.检测TMEM14A在卵巢癌的表达情况。收集卵巢癌及癌旁组织各30例,RT-PCR和IHC检测组织中TMEM14A的表达情况。qRT-PCR和Western blot检测A2780、SKOV3、 OVCAR3、HO-8910、CAOV3和3A06株卵巢癌细胞系中TMEM14A的表达情况,并筛选出2株高表达的卵巢癌细胞株进行后续的实验。2. TMEM14A干扰慢病毒的构建。TMEM14A慢病毒干扰高表达的A2780、HO-8910细胞,筛选出稳定转染的细胞。qRT-PCR和Western blot分别检测24h、72h后TMEM14AmRNA和TMEM14A蛋白的表达。3.TMEM14A对卵巢癌细胞生物学作用的体外研究。用A2780、HO-8910卵巢癌细胞,实验分为3组,TMEM14A-shRNA转染组(转染TMEM14A-shRNA重组质粒组,即RNAi组)、NC组(转染negative control-shRNA空质粒组),空白对照组(细胞常规培养,不加入TMEM14A-shRNA片段,即WT组)。CCK-8检测细胞的增殖能力；流式细胞术检测细胞周期分布；Transwell实验检测细胞侵袭能力；Western blot检测增殖相关蛋白(PCNA、 CyclinD1、CyclinE)、侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9)及通路相关蛋白(Smad-2、Smad-3及p-Smad-2、p-Smad-3)的表达。结果1. TMEM14A在卵巢癌的表达情况。1.1qRT-PCR结果显示：TMEM14A在卵巢癌组织中的相对表达量为0.739±0.029,癌旁组织为0.550±0.028,TMEM14A在卵巢癌组织中高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。IHC结果显示：癌组织中内棕黄色细腻颗粒弥漫分布,癌旁组织内可见少量阳性反应。卵巢癌组织中阳性表达明显高于癌旁组织的光密度值,差异有统计学意义(P<0.05)。1.2A2780、HO-8910细胞中,TMEM14AmRNA及蛋白的相对表达量较其他4株卵巢癌细胞高,差异有统计学意义(P<0.05)。故本研究将采用A2780、HO-8910细胞进行后续实验。2. TMEM14A干扰慢病毒的构建。转染24h后,qRT-PCR结果显示,A2780、HO-8910细胞干扰组TMEM14AmRNA的表达显著低于NC组(P<O.05),以TMEM14ARNAi-2组尤为明显(P<0.001)。转染72h后,WB结果显示,A2780、HO-8910细胞干扰组TMEM14A蛋白的表达显著低于NC组(P<0.05),以TMEM14ARNAi-2组尤为明显.(P<0.001)。3. TMEM14A对卵巢癌细胞生物学作用的体外研究结果。3.1CCK-8检测结果表明,A2780、HO-8910细胞干扰组中细胞增殖在48h、72h明显抑制(P<0.05)；3.2细胞周期检测结果显示,A2780、H08910细胞干扰组处于G1期的百分比(68.23±1.00)%、(61.47±1.15)%,显著高于NC组(P<0.05)；A2780、H08910细胞干扰组处于S期的百分比(18.79±2.50)%、(21.04±1.17)%,显著低于NC组(P<0.05)；A2780、H08910细胞干扰组处于G2期的百分比(10.37±2.95)%、(14.49±1.36)%,显著低于NC组(P<0.05)；A2780细胞干扰组处于G0/G1期百分比显著高于NC组(68.23%vs51.93%),而处于G2/M期和S期显著低于NC组分别为(18.79%vs28.44%；10.37%vs 17.66%)；HO-8910细胞干扰组与NC组除了G2/M期的百分比相当外,其他结果与A2780细胞相似；3.3Transwell侵袭实验结果显示,A2780细胞中,WT组、NC组和干扰组平均穿过小室膜的细胞数分别为(81±5)个、(74±3)个和(31±5)个。HO-8910细胞中,WT组、NC组和干扰组平均穿过小室膜的细胞数分别为(108±9)个、(99±6)个和(42±3)个。A2780、HO-8910细胞中,干扰组侵袭能力均较其他2组明显减弱,差异均具有统计学意义(F=124.665,P<0.05；F=94.545,P<0.05)。转染48h后,Western blot检测A2780、HO-8910细胞干扰组中PCNA、CyclinD1、CyclinE、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平及Smad-2、Smad-3蛋白的磷酸化水平均较其他2组明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TMEM14A在卵巢癌中高表达,TMEM14A基因可能是卵巢癌基因；转染TMEM14A-shRNA特异性干扰TMEM14A后,A2780、H08910细胞中TMEM14AmRNA与TMEM14A蛋白的表达下调；转染TMEM14A-shRNA特异性干扰TMEM14A后能通过下调PCNA、CyclinD1、CyclinE的表达抑制细胞的增殖,可能通过促进MMP-2和MMP-9的表达导致肿瘤的侵袭转移；同时引起Smad-2、Smad-3磷酸化水平显著下调,TMEM14A可能通过促发TGF-β通路促进卵巢癌的发生发展。TMEM14A可能成为卵巢癌诊断和治疗的潜在靶点。