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目的:通过体外实验探究天冬多糖对骨髓来源的抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的作用及作用机制,为天冬多糖抗肿瘤作用的临床应用提供理论依据。方法:1.通过沸水煮提、80%醇沉、Sevag法脱蛋白得到天冬多糖(Asparagus Polysaccharide,AP)。通过测量其在200-700nm波长紫外吸收峰和SDS-PAGE法验证其有无核糖和蛋白残余。利用毛细管层析电泳HPCE,分析AP的单糖组成。2.MTT法检测MDSCs细胞系MSC-2和淋巴细胞在用药前后的存活情况,证明AP是否具有细胞毒作用。FACS检测荷瘤鼠全脾细胞中MDSCs在用药前后的比例变化确认AP对原代MDSCs的抑制效果。3.Annexin V-FITC/PI双染法探究AP对MDSCs的抑制作用是否通过引起MDSCs的凋亡来实现的。Western Blotting法检测AP处理前后MDSCs的凋亡相关蛋白表达情况探寻其所激活的信号通路。观察Toll样受体4(TLR4)敲除的荷瘤鼠全脾细胞AP作用前后MDSCs的比例变化,探究AP发挥抑制MDSCs的作用是否通过该受体通路。结果:1.提取获得红棕色多糖,回收率为4.38%。多糖1mg/ml的水溶液在260nm和280nm处无核酸和蛋白质特异性紫外吸收峰。SDS电泳,未发现蛋白条带。HPCE结果显示,AP水解和衍生化后在葡萄糖、甘露糖和半乳糖对应位置出峰。1.FACS结果显示,经AP处理后,荷瘤鼠全脾细胞中MDSCs的比例降低,并且呈剂量依赖性。MTT结果显示,AP对MSC-2有抑制作用,其半数抑制浓度为0.4919mg/ml;而对淋巴细胞却有促进存活作用。2.Annexin V-FITC/PI双染法显示,经AP处理后Annexin V阳性的细胞比例增高,并且呈剂量依赖性。Western blotting结果显示,蛋白caspase-9、cleaved caspase-9、Bax和p-p65的表达量上调,而Bcl-2的表达量下调,并呈时间依赖性。FACS结果显示,TLR4敲除的荷瘤鼠全脾细胞经AP处理前后,MDSCs的比例并无明显变化。结论:1.中药天冬经以上方法提取和处理后其成分主要为多糖,有效的去除了蛋白质和核酸的残余。其主要单糖组成为葡萄糖、甘露糖和半乳糖。2.AP对MSC-2和原代MDSCs细胞有明显的抑制作用,而对原代淋巴细胞却有促进作用,表明其抑制作用是有选择性的。3.AP对MDSCs的抑制是通过促进其凋亡实现的,主要激活的是内源性凋亡途径,TLR4为其受体。