terW基因阳性肺炎克雷伯菌平板筛查法及初步应用

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ivyliucn
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【目的】研制用于筛查ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌的平板并对其进行性能评价;主动筛查并分析福建地区健康人群肠道中ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌定植情况、分子学特征、耐药模式等,有助于对ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌引起的感染的溯源、治疗和预防提供理论依据。【方法】1、收集福建医科大学附属第一医院住院患者中分离的198株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检测所有肺炎克雷伯菌株的rmp A、iut A、ter W基因,将rmp A或iut A阳性的肺炎克雷伯菌定义为高致病性肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella Pneumoniae,hv KP),rmp A和iut A基因同时阴性定义为经典肺炎克雷伯菌(classic Klebsiella Pneumoniae,c KP)。分析并比较ter W基因在hv KP和c KP中携带情况。应用琼脂稀释法确定抑制肺炎克雷伯菌生长的亚碲酸钾的最低浓度,即最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC),并分析肺炎克雷伯菌ter W基因型与亚碲酸钾抗性水平分布之间的关系。2、应用住院患者标本中分离的肺炎克雷伯菌株对自配的含4μg/ml亚碲酸钾的麦康凯平板进行性能评价。以PCR法检测肺炎克雷伯菌ter W基因型的结果作为“金标准”,分别计算含4μg/ml亚碲酸钾的麦康凯平板用于筛查ter W基因型肺炎克雷伯菌的敏感度、特异度、阴性预测值和阳性预测值。并评价该平板筛查ter W基因型肺炎克雷伯菌与“金标准”PCR法的一致性。3、应用自配的含4μg/ml亚碲酸钾的麦康凯平板主动筛查福建地区健康人群志愿者粪便标本。阳性菌株应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Time-of-Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)及纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B法)进行菌种鉴定及药敏分析。采用PCR法检测该平板分离的肺炎克雷伯菌rmp A、iut A、ter W基因以及高毒力相关的荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57),分析其毒力基因检出情况及荚膜血清型分子流行特征。【结果】临床标本分离的198株肺炎克雷伯菌中,iut A、rmp A、ter W基因检出率分别为40.9%(81/198)、40.4%(80/198)、37.9%(75/198)。根据本研究对hv KP的定义,将198株肺炎克雷菌分为85株hv KP和113株c KP。hv KP和c KP中ter W基因检出率分别为70.6%(60/85)、13.3%(15/113)。hv KP中ter W基因检出率明显高于c KP中ter W基因检出率(P=0.000,P<0.05)。根据ter W基因的PCR结果,选取全部75株ter W基因阳性型菌株以及随机选取55株ter W基因阴性型菌株检测其亚碲酸钾抗性水平:75株ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌亚碲酸钾抗性水平介于8μg/ml~128μg/ml,其中8μg/ml有1株(1/75,1.3%),16μg/ml有2株(2/75,2.7%),32μg/ml有23株(23/75,30.7%),64μg/ml有42株(42/75,56.0%),128μg/ml有7株(7/75,9.3%)。55株ter W基因阴性型肺炎克雷伯菌亚碲酸钾抗性水平介于<1μg/ml~8μg/ml,其中<1μg/ml有45株(45/55,81.8%),2μg/ml有5株(5/55,9.1%),4μg/ml有1株(1/55,1.8%),8μg/ml有4株(4/55,7.3%)。ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌的亚碲酸钾抗性水平明显高于ter W基因阴性型肺炎克雷伯菌(U=2.000,P=0.000,P<0.05)。选取全部75株ter W基因阳性型菌株以及随机选取55株ter W基因阴性型菌株对含4μg/ml亚碲酸钾的麦康凯平板进行评价,发现该平板的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100%(75/75)、92.7%(51/55)、94.9%(75/79)和100%(51/51)。含4μg/ml亚碲酸钾的麦康凯平板法与“金标准”之间的Kappa值为0.936,一致性水平较好。应用该平板主动筛查516份健康志愿者粪便标本,分离出86株ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌,分离率为16.7%,ter W基因阳性率100%(86/86)。其中荚膜血清型K1分离率为31.4%(27/86),K2分离率为14.0%(12/86),K5分离率为2.3%(2/86),K20分离率为2.3%(2/86),K54分离率为5.8%(5/86),K57分离率为9.3%(8/86)。K1、K2、K5、K20、K54、K57总和占比为65.1%,并且以K1、K2、K57最为常见。耐药率依次为:氨苄西林100%(86/86)、头孢唑林9.3%(8/86)、头孢曲松4.7%(4/86)、妥布霉素3.5%(3/86)、头孢吡肟2.3%(2/86)、哌拉西林/他唑巴坦2.3%(2/86)、环丙沙星2.3%(2/86)、亚胺培南0%(0/86)、美罗培南0%(0/86)。【结论】ter W基因是hv KP潜在的毒力相关基因。ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌具有较高水平的亚碲酸钾抗性。含4μg/ml亚碲酸钾的麦康凯平板法用于筛查ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌具有敏感度高、特异度强、快捷简便的优点,适于流行病学调查分析。福建地区健康人群肠道中ter W基因阳性型肺炎克雷伯菌定植率为16.7%,且对大部分抗生素都比较敏感,其中高毒力相关的荚膜血清型K1、K2、K5、K20、K54、K57均有检出,并以K1、K2、K57最为常见。
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