TRPC1与硝苯地平及环孢素A诱导的牙龈增生的相关性研究

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目的探讨经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)与硝苯地平(Nif)及环孢素A(CsA)单独及联合诱导的牙龈增生的相关性。方法体外组织块分离培养法分离培养人牙龈成纤维细胞(HGF),采用细胞表面标志物波形蛋白(Vim)和细胞角蛋白(CK),通过免疫细胞化学染色法(ICC)进行细胞表面标志物的鉴定。一定浓度的Nif和CsA单独及联合作用于体外培养的HGF,1 d、3 d、5 d、7 d后,采用CCK8检测试剂盒检测药物作用下HGF增殖能力和细胞活力的变化,同时在1 d、3 d、5 d、7 d后分别提取各组细胞mRNA和细胞总蛋白,通过实时荧光定量PCR和Western blot分别检测各组细胞TRPC1、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡标记分子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA和蛋白表达水平的变化及差异,ICC染色法检测各组细胞TRPC1的表达变化及差异情况。选择同课题组已经建模完成的大鼠牙龈组织切片,免疫组织化学染色法检测并比较各组TRPC1在牙龈结缔组织中的表达及差异情况。采用SPSS19.0进行统计分析,检测数据均以sx±表示,多组间差异的比较采用双因素重复测量资料的方差分析,之后的两两比较采用最小显著性差异法(LSD)检测。以P<0.05为差异有统计学意义。结果体外组织块分离培养法分离培养HGF,约6~8 d可观察到有细胞从组织块周边爬出,细胞多呈长梭形并呈漩涡状排列,ICC染色结果如下:HGF细胞表面抗原Vim抗体呈阳性表达,CK抗体呈阴性表达,表明培养出来的细胞为中胚层来源的牙龈成纤维细胞。CCK8结果显示,一定浓度的Nif、CsA和Nif+CsA均可提高HGF的生命活力,促进HGF的细胞增殖(P<0.05);实时荧光定量PCR和Western blot结果表明,Nif和CsA单独及联合作用于HGF后均可显著上调Bcl-2和TRPC1的表达(P<0.05),但PCNA的表达并没有显著变化;ICC染色法结果提示,TRPC1在Nif和CsA单独及联合刺激的成纤维细胞中其蛋白表达量明显增加;免疫组织化学染色的结果表明,TRPC1在Nif和CsA单独及联合刺激的牙龈结缔组织中的表达量显著上升。结论在Nif和CsA单独及联合作用下,HGF的增殖能力没有显著变化,但细胞凋亡抑制因子Bcl-2的表达量明显上升;而且大鼠牙龈结缔组织和HGF内TRPC1的表达量均明显上升,提示TRPC1可能在DIGO的发病过程中发挥一定的作用。
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