一、hnRNP A2／B1基因的克隆与原核表达 背景：肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，在全世界各种癌症死亡中，肺癌占据最高比例。肺癌的成功治疗有赖于对其早期诊断，而通常临床检出肺癌时已届晚期。现发现核不均一核糖核蛋白体A2／B1(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2／B1，hnRNPA2／B1)的单抗703D4，它能较常规的胸部X摄片和痰液脱落细胞学早1-2年检出肺癌。HnRNPA2／B1在所有正常细胞中存在低水平表达，在肺癌发生早期就呈现hnRNP A2／B1表达异常，随着肿瘤的生长，hnRNP A2／B1的表达水平在达到高峰后有所下降，但仍维持一定水平的表达。这揭示它有可能成为肺上皮转化和癌变的早期标志物。 目的：本实验拟克隆HnRNPA2／B1基因并构建全长cDNA的原核表达载体，在大肠杆菌中进行表达，获取hnRNP A2／B1蛋白，为开发hnRNP A2／B1单克隆抗体及其它相关应用研究提供基础。 方法：以RT-PCR法从人平滑肌肌细胞总RNA中克隆hnRNPA2／B1 cDNA，经克隆后予测序证实后，将其连接至pGEX-4T-1载体上，构建重组表达质粒；再将其转化至感受态E．coli BL21进行诱导表达，以亲和法获取纯化的融合蛋白。 结果：成功克隆出hnRNPA2／B1基因全长cDNA序列，经DNA测序证明与GenBank上一致。进而顺利构建重组表达载体PCEX-A2／B1，在E．coli中表达出相对分子量约63KD的融合蛋白，免疫分析证实为hnRNPA2／B1蛋白。 结论：成功克隆hnRNPA2／B1基因并构建重组表达载体，从而在E．coli获得融合表达，为进一步研究其功能及应用提供基础。