论文部分内容阅读
目的:重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)已严重危及人类的生命健康,其病程中常出现全身性炎症反应综合征、严重感染、感染性休克及多器官功能障碍综合征,导致死亡。随着对其发病机制研究的不断深入,巨噬细胞在SAP时抗原递呈激活免疫反应中起重要的作用。本研究旨在探讨氯膦酸二钠脂质体的制备,同时观察其对SAP大鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法:利用薄膜法制备氯膦酸二钠脂质体;经大鼠胰腺被膜下均匀注射牛磺胆酸钠制作SAP模型,分离培养大鼠腹腔巨噬细胞,经不同剂量的氯膦酸二钠脂质体(50、100、150μL)作用,然后采用MTT法检测氯膦酸二钠脂质体对腹腔巨噬细胞增殖的影响,应用中性红比色法检测巨噬细胞的吞噬功能,通过检测NO、O2-·和H2O2的含量来评估巨噬细胞的氧化应激功能,采用Annexin V/PI双标记法和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测巨噬细胞的凋亡情况。结果:所制备的脂质体直径100-200nm,clodronate包裹率为(5.8%),透射电镜检查见其大小均匀。获得的腹腔巨噬细胞形态正常,经瑞氏染色法鉴定纯度>90%,台盼蓝染色,细胞存活率>95%。在三种不同浓度氯膦酸二钠脂质体的干预下:MTT结果显示巨噬细胞的生长受到明显抑制(P<0.01),抑制率随药物作用时间和剂量的增加而增加;巨噬细胞吞噬中性红结果表明其吞噬功能受到明显抑制,抑制率分别为17.4%,25.8%和38.O%;巨噬细胞分泌NO、O2-·的能力也受到明显抑制,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05);巨噬细胞产生H2O2的能力仅在100μL与150μL时受到明显抑制(P<0.05);流式细胞术检测发现,在三种不同剂量氯膦酸二钠脂质体干预下,PM凋亡百分率分别为(10.32±0.34)%,(18.16±0.49)%和(29.87±0.35)%,差异均有显著性(P<0.01);经1.2%琼脂糖凝胶电泳显示,随氯膦酸二钠脂质体浓度的增高出现渐清晰的特征性梯状带。结论:利用薄膜法制备氯膦酸二钠脂质体操作简单,方法易于掌握,我们在实验中成功制备出了氯膦酸二钠脂质体,通过透射电镜发现其大小均匀。在本实验中,我们发现,氯膦酸二钠脂质体具有抑制SAP大鼠腹腔巨噬细胞功能的作用,同时,氯膦酸二钠脂质体亦可诱导SAP大鼠腹腔巨噬细胞的凋亡。本实验为SAP的临床治疗提供了新的理论依据。