PCV2感染仔猪急性期蛋白的变化

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本文通过仔猪试验性感染PCV2,动态测定血清中急性期蛋白浓度和肝脏急性期蛋白表达的变化,并观察了调控这些蛋白的2条主要通路IL-1R-NF-κB和IL-6R-NF-KB的变化,为PCV2相关疾病的发生机理和临床诊断提供依据。19头ELISA检测PCV2、PRRSV抗体阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分为对照组4头和攻毒组15头。仔猪在攻毒后3、7、10、14、21、28和35d采集血液,并在14、21和35d分别剖杀5头。用ELISA方法检测C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、结合珠蛋白(Haptoglobin, HP)、血清淀粉样蛋白A (Serum Amyloid A, SAA)、α1-酸性糖蛋白(alpha-1Acid Glycoprotein, AGP)、猪主要急性期蛋白(Pig-Main Acute Phase protein, Pig-MAP)和载脂蛋白-A I (Apolipoprotein-A I, Apo-A I)的动态变化。同时测定肝脏中APPs mRNA和IL-1R、IL-6R mRNA表达的变化;用激光共聚焦显微镜对NF-κB的表达和入核情况进行间接免疫荧光法检测。结果显示,仔猪接种PCV2后出现嗜睡,生长迟缓,消瘦,呼吸急促体温上升等临床症状。镜检肝脏的主要组织病理学变化是:低倍镜下,肝小叶结构明显,小叶间结缔组织增生,肝细胞索排列紊乱,肝细胞肿大,呈明显水泡变性,增生的结缔组织和实质中,可见多量炎性细胞浸润;高倍镜下,肝细胞肿大,呈明显空泡化,肝实质中浸润有多量嗜酸性粒细胞,增生的结缔组织中见有多量嗜酸性粒细胞浸润,攻毒后21d肝脏损伤最明显,除上述各种病变外,尚出现明显的坏死灶。仔猪接种PCV2后,不同APPs具有不同的变化,多数在攻毒后14-21d有升高的趋势。血清Pig-MAP在攻毒后7d达到峰值,在7和10d显著高于对照组(P<0.05);血清SAA的变化在攻毒后7d和21d显著高于对照组(P<0.05);血清Apo-A I攻毒后21d显著高于对照组(P<0.05),其余时间差异均不显著;血清AGP在攻毒后10d和35d显著低于对照组(P<0.05);血清HP含量的变化,在攻毒后早期(0~10d)变化不明显,除攻毒后14和28d血清HP含量显著低于对照组(P<0.05)外其余时间差异均不显著(P>0.05);血清CRP的含量变化不明显。PCV2感染仔猪肝脏各种APP mRNA的表达呈现不同的变化。IL-1R mRNA表达和Ⅰ类APPs(CRP, SAA和AGP)mRNA的表达呈明显正相关,相关系数分别达到:0.65,0.83和0.78;IL-6R mRNA与Ⅱ类APPs (HP和pig-MAP) mRNA之间无明显相关;PCV2攻毒后NF-κB的表达和入核率在14和21d升高。结果证实,PCV2可以通过IL-1R-NF-κB信号系统调控Ⅰ类APPs mRNA的表达,而Ⅱ类APPs mRNA的表达机制有待进一步研究。以上结果表明:(1)仔猪在接种PCV2后,出现了以肝细胞变性,小叶间结缔组织增生和嗜酸性粒细胞浸润为特征的病理学损伤。(2)PCV2攻毒后,各种APP变化规律不同,CRP的变化与肝脏的病理损伤有关;Pig-MAP可以作为病程发展的重要检测指标,对监测PCV2感染、疾病的预后起重要作用;HP可以反应肝脏自由基损伤程度;两种具有载脂功能的蛋白SAA和Apo-A I在攻毒期间起到互补的作用,以维持肝脏脂类代谢。(3)PCV2可以通过过IL-1-IL-1R-NF-κB信号系统调控Ⅰ类APPs mRNA的表达。
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