链霉菌C-3662产生的纤溶活性蛋白酶CGW-3的纯化、理化性质及药效学

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouqjj
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本研究首先从60株链霉菌中筛选出分泌具有纤溶活性蛋白酶的链霉菌C-3662,随后对该菌的发酵条件进行了研究,并从链霉菌C-3662的发酵液中纯化出了具有纤溶活性的蛋白酶CGW-3,并对CGW-3的理化性质及对血栓的药理药效学机制进行了初步探讨,结论是CGW-3是一种具有一定开发潜力的抗栓溶栓药物。 已知多数链霉菌菌株分泌蛋白酶,这些蛋白酶的性质各异、专一性有别。为了筛选出对纤维蛋白活性较高并具有一定选择性的蛋白酶,我们设计了如下筛选方法:将链霉菌菌株接种于斜面培养基,28℃培养7-14天后挖块,分别置于纤维蛋白平板及酪蛋白平板,37℃保温过夜,选择出在纤维蛋白平板上产生较大透明圈而在酪蛋白平板上不产生透明圈的链霉菌菌株。我们从本所保存的从土壤中分离的60株链霉菌筛选出在纤维蛋白平板上产生较大透明圈而在酪蛋白平板上不产生透明圈的链霉菌C-3662。 对链霉菌C-3662发酵纤溶活性蛋白酶的发酵流程及培养基组成进行了研究,以获得纤溶活性最高的发酵液,结果表明,链霉菌C-3662接种于合成5号斜面上,28℃培养5-7天(长满丰富的白色或白灰色孢子),然后接种于液体种子培养基,其组成为葡萄糖2.5%、淀粉1.0%、黄豆饼粉2.0%、K-H2PO4 0.05%、MgSO4·7H2O 0.05%、CaCO3 0.3%,在28℃摇床上振荡培养48小时,接着按4%-5%左右的比例转种于发酵培养基,其组成与种子培养基相同,在28℃继续培养96小时后,就可以收获发酵液。在发酵液中加入1%左右的硅藻土助滤剂,离心或真空抽滤去菌丝,收集发酵上清液。 从该上清液中分离纯化出一种具有纤溶活性的蛋白酶,命名为CGW-3。所建立的纯化流程如下:加硫酸铵于上清液中至90%以上饱和度,于4-8℃放
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