犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)引起的一种高传染性、高致病性的传染病，临床表现为出血性肠炎以及化脓性心肌炎，断奶前后的幼犬极易感染,给养犬业健康发展造成了严重损失。
　　CPV非结构蛋白-1(Nonstructural Protein-1, NS1)是CPV编码的主要非结构蛋白，该蛋白是一种反式激活因子，在病毒的复制和转录中起到重要作用。研究证实CPVNS1蛋白也是CPV重要的毒性蛋白，它可破坏宿主细胞的线粒体，引起活性氧的产生，进而诱导宿主细胞的凋亡，造成感染组织的损伤。然而由于目前尚无市售的NS1抗体，阻碍了人们对NS1生物学功能和毒性作用的进一步探讨，所以研究和制备NS1的特异性抗体是十分必要的。
　　为了制备NS1单克隆抗体，本试验首先通过PCR方法从NS1表达载体中扩增了编码190个氨基酸(AA461~AA650)组成的NS1抗原表位蛋白基因，并将其插入pGEX-4T-1载体中，构建了与GST标签融合的原核表达载体pGEX-GST-NS1，并利用大肠杆菌进行了表达。通过GST磁珠进行蛋白的分离纯化，经SDS-PAGE检测表明制备的融合蛋白纯度达98%以上，利用GST抗体，经Western-blot检测证明制备的重组蛋白为NS1融合蛋白。将纯化的NS1蛋白作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫，分离小鼠脾淋巴细胞并与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经过ELISA筛选，获得了稳定表达NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞。经Western-blot检测表明，表达的单克隆抗体可以与重组NS1蛋白进行特异结合，并能够特异检测CPV感染细胞和NS1载体转染细胞中的NS1蛋白，表明NS1单克隆抗体制备成功。经鉴定制备的单克隆抗体为IgG1型。最后通过小鼠腹腔接种杂交瘤细胞，用ProteinG从小鼠腹水中分离纯化大量NS1单克隆抗体，抗体效价达1∶64000。
　　以制备的NS1单克隆抗体为一抗，用荧光素标记抗小鼠IgG为二抗，并结合特异的细胞器荧光素染料对感染CPV的F81细胞进行染色，利用激光共聚焦显微镜观察，初步分析了NS1蛋白在细胞中的定位，结果发现NS1蛋白不仅定位于细胞核也定位于内质网和线粒体。本研究为进一步探讨NS1的生物学功能和对宿主细胞的毒性作用提供了必要条件。