植物病害生防菌粉红粘帚霉67-1发酵工艺研究

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粘帚霉是一类重寄生真菌,在植物病害生物防治中具有重要的价值。本实验以粉红粘帚霉(Clonostachys rosea)67-1为材料,研究了该菌株液生孢子的形成过程与抗性特征,调试了该菌株液体深层发酵的工艺参数,制备了粘帚霉生防菌剂并开展了田间试验,为建立可行的微生物农药生产线做了应有的准备。实验结果如下:1.在测定了粉红粘帚霉67-1的生理性状的基础上,观察明确了该菌株在土豆葡萄糖培养液中生长的4个阶段,分别为:孢子萌发阶段、菌丝延长阶段、分生孢子形成阶段与厚垣孢子形成阶段;2.分析比较了多种不同培养条件对粉红粘帚霉67-1产孢数目的影响,找到了最适合其产厚垣孢子的两种关键营养因子:豆饼粉和尿素,其最适配比为3:1;确定了产孢培养基最佳初始pH值为:7,最佳接种量为:2×10~8/mL的孢子悬液接种2%;3.将含有厚垣孢子的液生孢子悬液与PDA平板中洗脱的气生分生孢子悬液分别进行高温、干燥、紫外线照射处理,测定孢子存活率。结果表明,60℃处理30min,液生孢子存活率降至76.7%,气生孢子几乎完全不能存活;干燥处理两周后液生与气生孢子存活率分别降至89.2%、29.3%;紫外灯(40W,300Lx)照射1min后,液生孢子的存活率降至72.6%,气生孢子的存活率仅为原来的19.7%。说明本研究使用的液生孢子比普通气生孢子对不良环境具有更高的抗性;4.在16L原位灭菌发酵罐中进行了反复调试,使粘帚霉液体发酵终点孢子浓度达到了2×10~8/mL,其中厚垣孢子占20%左右,并将相关液体发酵工艺参数比拟放大到500L蒸汽灭菌发酵罐中,取得了相同结果,完成了车间中试,为菌剂制备提供了发酵原液;5.将发酵液离心浓缩后,加入载体吸附,制备了浓度为2×10~8cfu/g的粘帚霉孢子粉剂,用于小麦种子和苗期处理,结果表明,该菌剂在扬花期对小麦纹枯病的防效高于其他两种化学农药,分别高出13.7%和5.9%。上述结果为粉红粘帚霉67-1菌剂生产奠定了基础,但在粘帚霉发酵液后处理方面仍有许多问题尚待解决。
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