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三疣梭子蟹是我国重要的经济蟹类,商品价值极高。由于捕捞强度过大和生态环境恶化,世界各国的自然资源量正在下降,因而加大人工繁殖和增养殖的研究显得十分迫切。
本实验系统研究三疣梭子蟹雌蟹性腺、胚胎和初孵幼体发育过程中主要生化组成的变化,旨在探明三疣梭子蟹卵巢发育期间卵巢营养物质的来源、胚胎发育期间能量利用模式和初孵幼体的营养需求,这对于我们认识三疣梭子蟹亲本、胚胎和幼体的能量和营养代谢的机制,指导幼体和亲本培育具有十分重要的理论意义和现实意义。
一、三疣梭子蟹卵巢发育过程中生长及主要生化组成的变化通过定期采集三疣梭子蟹卵巢发育各期(Ⅰ期-Ⅵ期)雌蟹样品,以其甲长、甲宽、体重、肝胰腺指数、卵巢指数、肌肉指数、肝胰腺含水量、卵巢含水量、肌肉含水量及肝胰腺、卵巢、肌肉中蛋白质、脂类、碳水化合物含量作为指标,分析三疣梭子蟹卵巢发育过程中生长及主要生化组成的变化。结果表明:1.三疣梭子蟹甲长、甲宽、体重,Ⅱ期-Ⅵ期相比Ⅰ期增加较多,差异显著(p<0.05),而Ⅱ期-Ⅵ期间却无显著差异。2.整个卵巢发育过程中肝胰腺指数Ⅰ期-Ⅳ期变化不大,Ⅴ期、Ⅵ期下降,与前四期差异显著(p<0.05),;卵巢指数Ⅰ-Ⅴ期一路上升,排卵后,Ⅵ期降到较低水平,其中Ⅰ期、Ⅱ期变化不大(p>0.05),Ⅱ期-Ⅲ期、Ⅲ期-Ⅳ期、Ⅳ期-Ⅴ期差异显著(p<0.05),;肌肉指数呈Ⅰ期-Ⅳ期升,Ⅳ期-Ⅴ期降,Ⅴ期-Ⅵ期呈上升趋势,均无显著差异性(p>0.05),3.而肝胰腺含水量变化不大(p>0.05);而卵巢含水量则是:Ⅰ期、Ⅱ期变化不大(p>0.05),Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期相比前两期下降显著(p<0.05),Ⅵ期上升到最高值;而肌肉含水量变化不明显(p>0.05)。
4.肝胰腺干样中蛋白质含量下降不显著(p>0.05),而湿样中蛋白质含量下降显著(p<0.05);卵巢干样中Ⅰ期-Ⅴ期下降(p<0.05),Ⅴ期-Ⅵ期上升(p<0.05),而湿样中蛋白质含量Ⅰ期-Ⅴ期上升(p<0.05),Ⅴ期-Ⅵ期下降(p<0.05);肌肉(干样、湿样)中蛋白质含量亦稍有上升(p>0.05)。
5.肝胰腺干样中脂类含量Ⅰ期-Ⅳ期变化不大(p>0.05),Ⅴ期升到最高值(p<0.05),Ⅵ期下降到最低值(p<0.05),而湿样中Ⅰ期-Ⅴ期变化不大,Ⅵ期下降(p<0.05);卵巢(干样、湿样)中脂类含量Ⅰ期-Ⅴ期上升(p<0.05),Ⅵ期下降(p<0.05);肌肉(干样、湿样)中脂类含量变化不大(p>0.05)。
6.肝胰腺干样中碳水化合物含量Ⅴ期最低,与其它各期差异显著(p<0.05),而湿样中Ⅴ期、Ⅵ期显著低于其它各期(p<0.05);卵巢(干样、湿样)中碳水化合物含量Ⅰ期-Ⅴ期上升(p<0.05),Ⅵ期下降(p<0.05);肌肉(干样、湿样)中碳水化合物含量Ⅰ期-Ⅵ期呈上升趋势(p<0.01)。
二、三疣梭子蟹胚胎发育过程中主要生化组成及能量消耗的变化采用受精卵离体培养技术,通过每天测量卵径变化来研究胚胎发育过程中单个卵体积的变化规律;在胚胎发育过程中通过对抱卵亲本的胚胎进行连续采样,系统研究胚胎发育过程中单卵干重、湿重和主要生化组成(水分、蛋白质、脂肪、碳水化合物)的变化,探讨三疣梭子蟹胚胎发育过程的主要能量来源。结果表明:1)三疣梭子蟹胚胎发育过程中,胚胎体积持续增加,由受精卵时的(24.5±1.72)×106μm3增加到孵化前的(39.2±2.8)×106μm3(P<0.01);2)单卵发育过程中水分呈上升趋势(P<0.05),由受精卵时的(19.88±1.65)μg升到心跳期的(30.51±3.77)μg,水分含量升高了53.46%;单卵干重呈下降趋势,由受精卵时的(13.08±1.004)μg到心跳期(心跳>100次/分钟)的(12.47±0.745)μg,单卵干重下降了4.64%;3)胚胎发育期间,单个卵中的蛋白质、脂肪和糖类均有所下降,脂肪含量下降幅度最大36.23%-57.14%,蛋白质下降幅度为18.49%-29.50%,糖类减少幅度为24.04%-47.78%,单个卵中减少的主要为蛋白(1.97±0.35)μg和脂肪(1.99±0.65)μg。三疣梭子蟹胚胎发育期间能量主要由脂类提供(69.66±19.01)%,其次为蛋白(28.35±4.35)%。三疣梭子蟹胚胎发育过程中,脂类和蛋白质分别充当了不同时期胚胎发育的主要能量来源。卵裂期到囊胚期、原肠期至卵内无节幼体期,主要由蛋白质供能;其它各期主要由脂类供能。
三、饥饿对三疣梭子蟹幼体生化组成的影响将三疣梭子蟹初孵幼体饥饿条件下养殖,每12h采样一次,研究蚤Ⅰ幼体饥饿条件下单个幼体湿重、干重和主要生化组成(蛋白质、脂肪、碳水化合物)的变化,探讨三疣梭子蟹蚤Ⅰ幼体饥饿条件下主要动用哪种物质作为能量来源。结果表明:1)单个蚤Ⅰ幼体饥饿72h内湿重、干重均为先上升后下降;2)单个蚤Ⅰ幼体中饥饿72h内蛋白质、脂肪和碳水化合物均呈下降趋势,蛋白质含量下降幅度最大60.21%,脂肪下降幅度为51.06%,碳水化合物减少幅度为20.39%,单个卵中减少的主要为蛋白(3.13μg)和脂肪(0.67μg)。三疣梭子蟹初孵幼体饥饿条件下能量的消耗主要由蛋白质提供(66.98%);其次为脂类(32.42%);而碳水化合物仅为0.88%。
四、池塘养殖和野生三疣梭子蟹抱卵量的比较研究系统研究和比较池塘养殖和野生三疣梭子蟹人工繁殖亲本的体重、甲壳长、甲壳宽、抱卵量、生殖力和单个卵重等指标,结果表明:1.人工育苗用野生三疣梭子蟹的体重、甲壳长、甲壳宽、抱卵量显著高于池塘养殖蟹(P<0.05);2.野生三疣梭子蟹的平均生殖力(fecundity,个卵/克亲本)和单个卵重也大于池塘养殖梭子蟹,但是由于变异系数较大,并无统计学的差异(P>0.05);3.池塘养殖三疣梭子蟹的抱卵量与体重、甲壳长和甲壳宽相关系数高于野生梭子蟹,无论野生还是池塘养殖梭子蟹的抱卵量与体重、甲壳长和甲壳宽呈正相关,且抱卵量与甲壳长的相关系数最高。因此,我们可以利用三疣梭子蟹的甲壳长和甲壳宽来预测其抱卵量。