前言多西紫杉醇（docetaxel,DOC）为细胞有丝分裂抑制剂,通过促进小管聚合成稳定的微管并抑制其解聚从而使游离小管的数量明显减少,进而影响细胞的有丝分裂。目前临床上DOC已经应用于乳腺癌,胃癌,肺癌,食管癌等的治疗。同时,细胞膜上钾离子通道的活性在细胞的有丝分裂G₁期中起关键作用,有研究证实,钾离子通道阻断剂能够抑制细胞的增殖,但具体机制不明。前期研究显示DOC不单通过抑制微管蛋白解聚影响血管生成,基因表达而达到抗肿瘤的作用,而且DOC对钾离子通道具有关闭作用,进而抑制乳腺癌细胞的增殖。本研究旨在探讨钾离子通道阻断剂4—氨基吡啶（4-AP）与DOC联合应用后,是否对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,细胞周期以及凋亡的影响具有协同作用,以期对临床上药物的联合应用提供实验依据。实验方法1、用四氮唑蓝比色法（MTT法）检测药物抑制MCF-7细胞增殖的作用取对数生长期细胞接种孵育,药物处理24、48、72h后,每孔加5μg·μL^-1的MTT 10μl,37℃继续培养4h后弃液,每孔加DMSO 100μl,60 rpm振荡10min,ELx800通用型酶标仪于570 nm处测OD值,并计算增殖抑制率。抑制率计算如下:抑制率（%）=（对照孔OD均值-实验孔OD均值）/对照孔OD均值×100%。2、流式细胞术PI单染法检测检测药物对MCF-7细胞周期变化取对数生长期细胞接种,药物处理24h后收集细胞,1000 rpm离心5 min,弃上清,加入10³μl冰冷的PBS使细胞悬浮,重复以上步骤3次后缓缓加入10³μl冰冷的75%乙醇,4℃过夜,次日,1500 rpm离心10 min,小心弃上清后加入10³μl冰冷的PBS使细胞悬浮,1500 rpm离心5 min后小心弃上清,加入0.1μg·μL^-1PI和0.1μg·μL^-1Rnase A各500μl,37℃培养40 min后流式细胞仪检测细胞周期。3、流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测药物对MCF-7细胞凋亡的影响取对数生长期细胞接种,药物处理24h后收集细胞,1000 rpm离心10 min,弃上清,加入10³μl冰冷的PBS使细胞悬浮,重复以上步骤两次,然后将细胞重悬于200μl Binding Buffer中,加入10μl Annexin V-FITC和5μl PI混匀,室温避光反应15 min,加入300μl Binding Buffer混匀,1h内流式细胞仪检测细胞凋亡。实验结果1、DOC与4-AP对MCF-7细胞增殖的影响DOC与4-AP能明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,并呈剂量和时间依赖性。5×10³μmol·L^-14-AP与各浓度的DOC联合作用能使DOC的作用明显增强,并能产生相加甚至协同作用（P＜0.05）。2、DOC与4-AP对MCF-7细胞周期的影响5μmol·L^-1DOC能够使人乳腺癌细胞株MCF-7的周期阻滞在G₂/M期,由对照组的8.83%±0.44%增加至53.58%±1.44%（P＜0.01）,5×10³μmol·L^-14-AP也能使细胞产生周期阻滞,但阻滞在G₀/G1期,细胞比率由的63.89%±0.98%增加至76.56%±1.34%（P＜0.05）,而G₂/M期细胞比率由对照组的8.83%±0.44%减少至0.42%±0.17%（P＜0.05）;5×10³μmol·L^-14-AP对DOC作用于MCF-7细胞的影响是使DOC阻滞在G₂/M期的细胞比率减少,而在G₀/G₁期的细胞比率增加。3、DOC与4-AP对MCF-7细胞凋亡的影响5μmol·L^-1DOC能够增加人乳腺癌细胞株MCF-7的晚期凋亡和坏死,但对早期凋亡并不明显,5×10³μmol·L^-14-AP对MCF-7细胞的早期凋亡也不明显,但两者联合应用后,5×10³μmol·L^-14-AP能明显增强DOC对MCF-7的早期凋亡、晚期凋亡及坏死。其中,早期凋亡（LR）细胞由对照组的4.60%±0.91%增加到12.20%±0.82%晚期凋亡和死亡细胞（UR）由对照组的6.97%±0.75%增加到58.42%±0.31%,（P＜0.05）。结论本实验分别研究了DOC和4-AP作用于MCF-7细胞后对细胞增殖、周期和凋亡的影响,研究结果显示:DOC和4-AP分别在G₂╱M期和G₀/G₁期抑制MCF-7细胞增殖,4-AP能够通过促进DOC诱导细胞凋亡发挥抑制MCF-7细胞增殖的作用。