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目的:本课题拟通过加味半夏白术天麻汤干预肥胖性高血压大鼠,应用现代分子生物学技术,以下丘脑、主动脉为靶器官,以瘦素/瘦素受体和瘦素介导的JAK2/STAT3途径为切入点,观察加味半夏白术天麻汤对瘦素介导的下丘脑JAK2/STAT3通路的影响,评估加味半夏白术天麻汤降压、减肥的药效并初步明确其机制,为从本质上改善肥胖性高血压、平衡机体神经-内分泌功能、预防心血管事件的发生提供新的治疗思路。方法:1.肥胖性高血压大鼠的模型建立:143只wistar大鼠采用高脂饲料饲养25周的方法造模,同时取16只wistar大鼠为对照组,给予普通饲料饲养。25周后,筛选高脂饲料组中体重、血压均超过(≥)对照组平均值25%的63只大鼠纳入模型组。定期记录两组大鼠体重、血压,检测血脂及血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、瘦素(Lep)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)水平,观察主动脉、心、肝、肾等靶器官形态。2.加味半夏白术天麻汤改善肥胖性高血压的药理学研究:33只模型组大鼠随机分为加味半夏白术天麻汤高剂量组(8只,HBBTMD组,9.2 g?kg-1?d-1),加味半夏白术天麻汤低剂量组(8只,LBBTMD组,4.6 g?kg-1?d-1),替米沙坦组(8只,TEL组,3.4 mg?kg-1?d-1),模型组(9只,生理盐水2ml?d-1),与对照组(10只,生理盐水2ml?d-1),共灌胃12周,定期记录检测大鼠血压、体重。12周后,大鼠麻醉后,取血、下丘脑、主动脉及内脏脂肪组织。检测大鼠血清血脂、Lep、AngⅡ、NPY及NO的含量。HE染色观察各组大鼠脂肪组织及主动脉组织形态。免疫组织化学染色法观察大鼠下丘脑及主动脉中瘦素受体(Lep R)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的分布。RT-PCR检测大鼠下丘脑及主动脉JAK2、STAT3、SOCS3、Lep R及AT1R的m RNA表达改变。Western Blot法检测大鼠下丘脑中JAK2、STAT3、SOCS3、Lep R及AT1R的蛋白表达含量。3.JAK2/STAT3是加味半夏白术天麻汤发挥中枢调节药效的主要作用通路的验证实验:通过对大鼠第三脑室注射AG490(JAK2特异性拮抗剂),阻断下丘脑JAK2/STAT3信号转导通路,观察推测加味半夏白术天麻汤是否主要通过作用于JAK2/STAT3通路发挥药效。12只HBBTMD组大鼠随机分为AG490+HBBTMD组(6只),HBBTMD组(6只);12只模型组大鼠随机分为AG490+模型组(6只),模型组(6只);AG490+HBBTMD组与AG490+模型组第三脑室注射2μmol/ml AG490溶液5μl,HBBTMD组与模型组第三脑室注射生理盐水5μl。2h后麻醉大鼠取下丘脑,Western Blot检测下丘脑JAK2、STAT3及SOCS3的蛋白表达含量。结果:1.肥胖性高血压大鼠模型的建立:经高脂饲料饲养25周后,与对照组相比,模型组体重、血压显著升高(P<0.05),TC、LDL-C明显升高(P<0.05),TG、HDL-C无明显变化(P>0.05)。模型组的AngⅡ、Lep和ET-1显著升高(P<0.05),NO显著下降(P<0.05)。可观察到模型组大鼠脂肪细胞体积明显增大,主动脉重塑,心肌细胞肥大样变,肝细胞脂肪样变及部分肾小球坏死。2.加味半夏白术天麻汤改善肥胖性高血压的药理学研究:经药物干预12周后,各组肥胖性高血压大鼠的血压体重均有不同程度的下降,其中,HBBTMD组体重、血压显著下降(P<0.05)。HBBTMD组与LBBTMD组的TC、LDL-C下降(P<0.05),HBBTMD组血清循环AngⅡ、Lep和NPY水平显著下降(P<0.05),NO显著升高(P<0.05)。HE染色观察HBBTMD组的脂肪细胞体积减小,高血压主动脉重塑程度显著改善。免疫组化显示HBBTMD组下丘脑及主动脉AT1R分布密度显著减少(P<0.05),下丘脑Lep R分布密度增加(P<0.05),主动脉Lep R分布密度减少(P<0.05)。RT-PCR显示HBBTMD组和LBBTMD组下丘脑的Lep R、JAK2、STAT3的m RNA表达量显著上升(P<0.05),SOCS3及AT1R的m RNA表达量显著下降(P<0.05)。HBBTMD组和LBBTMD组主动脉的Lep R、JAK2、STAT3、SOCS3及AT1R的m RNA表达量显著下降(P<0.05)。HBBTMD组下丘脑的JAK2、Lep R、STAT3的蛋白表达量显著上升(P<0.05),SOCS3及AT1R的蛋白表达量显著下降(P<0.05)。提示加味半夏白术天麻汤可能通过调节下丘脑功能、改善机体瘦素抵抗,发挥降压减肥的功效,其药理作用与JAK2/STAT3信号通路关系密切。3.JAK2/STAT3通路是加味半夏白术天麻汤发挥中枢调节药效的主要作用通路的验证实验:模型组大鼠在第三脑室注射AG490后,下丘脑JAK2及STAT3蛋白的表达几乎被完全阻断(P<0.05)、SOCS3的蛋白表达显著升高(P<0.05);HBBTMD组大鼠在第三脑室注射AG490后,下丘脑JAK2及STAT3蛋白的表达量急剧显著下降(P<0.05),SOCS3蛋白的表达量显著上升(P<0.05),但是仍然比模型组及AG490+模型组大鼠JAK2及STAT3蛋白的表达量略高(P<0.05),SOCS3蛋白的表达量略低(P<0.05)。结果提示JAK2/STAT3通路可能不是加味半夏白术天麻汤发挥中枢调节的唯一作用通路,但确是其发挥药效的最主要作用通路之一。结论:加味半夏白术天麻汤可以降低肥胖性高血压的大鼠的体重、血压、血脂及血清AngⅡ、Lep、NPY水平,升高血清NO水平。通过对肥胖性高血压大鼠下丘脑和主动脉的m RNA和蛋白质表达分析,推测其机制与其改善机体瘦素抵抗密切相关。经证实,加味半夏白术天麻汤可以有效通过激活下丘脑中JAK2/STAT3途径,抑制SOCS3的表达,因此,推测JAK2/STAT3信号转导通路是加味半夏白术天麻汤发挥改善选择性瘦素抵抗、降压减重药效的主要作用通路。