铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是一种条件致病菌，能引起人体急性和慢性感染。急性感染主要与三型分泌系统(typeⅢsecretion system，T3SS)和运动能力有关，而慢性感染主要与六型分泌系统(typeⅥsecretion system，T6SS)和生物被膜有关。铜绿假单胞菌可以利用T3SS向宿主分泌毒性蛋白，逃避吞噬细胞的吞噬，引起宿主上皮细胞和巨噬细胞的损伤，破坏胞内信号或者导致细胞死亡。铜绿假单胞菌主要分泌4种毒性蛋白来发挥作用:包括胞外酶S(ExoS)，胞外酶T(ExoT)，胞外酶U(ExoU)以及胞外酶Y(ExoY)。目前，T3SS调控网络的研究并不清楚，还有很多未知的调控因子没有发现。本研究以铜绿假单胞菌的效应蛋白ExoS作为突破点，通过构建转座突变库筛选对exoS的表达有调控的基因。将exoS的启动子与lux报道子融合，整合至PAO1菌株中，并在此菌的基础上构建转座突变体库。根据发光强弱的变化，结果共筛选到15个影响exoS表达的基因，包括已知的exsA，pcrD和vqsM等，以及几个未知功能的基因，如:PA5264，PA4857等。　　本文对PA4857进行了重点研究(根据PA4857功能将其命名为tspR)。在PAO1中敲除掉tspR基因(AtspR)，发现效应蛋白ExoS、生物被膜的形成量以及细胞毒性均降低，突变体对小鼠的致病能力也有所影响。进一步的研究还发现tspR对调控RsmA的两个小RNA:RsmY和RsmZ，均有负调控作用。ExoS在两个双突变ΔtspRΔrsmY、ΔtspRΔrsmZ中的表达量以及生物被膜的形成量基本恢复到野生型水平。同时，在retS突变体中，T3SS的表达量和生物被膜的形成量可以通过过表达tspR而部分恢复到野生型水平。这说明RetS正调节tspR，而TspR通过调控两个小RNA(RsmY/RsmZ)来调控T3SS。因此，本研究发现了一个与retS-gacS系统相协调的新的调控途径:retS-tspR途径。这些研究结果为进一步理解T3SS这一复杂的调控网络提供了新的认识。