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Toll样受体作为一种重要的模式识别受体，能够识别病源微生物的结构组分和代谢产物。Toll样受体不仅在抗感染免疫中发挥重要作用，而且也参与自身免疫性疾病的发生发展。肝脏是机体最大的解毒器官，长期接触来自肠道的病原体成分。大量证据表明，病源微生物和Toll样受体与肝脏疾病进程有密切关系，但是Toll样受体及其下游信号影响肝脏疾病进程的机制还需进一步研究。本课题旨在利用小鼠肝脏损伤模型进一步探讨Toll样受体影响肝损伤发生发展的机制：一方面，我们发现TLR3信号可以通过下调巨噬细胞上TLR4表达，从而减轻内毒素诱导的小鼠爆发性肝损伤：另一方面，CpG-TLR9信号能特异性募集和活化肝脏NKT细胞，并加重Con A诱发的小鼠急性肝损伤。实验过程中，我们采用赖氏法检测血清转氨酶水平、ELISA方法检测细胞因子水平，组织染色方法观察肝脏病理学变化，利用以上指标综合评估肝脏损伤程度；通过抗体清除、细胞转输、细胞纯化和杀伤实验，研究特定淋巴细胞群体在肝脏损伤过程中的作用；采用流式细胞术测定巴细胞亚群的表型和受体分子的表达，并对其活化状态和细胞因子分泌功能进行分析；用Western blotting的方法检测胞内信号分子的活化。通过上述研究方案获得了如下结果：TLR3配基通过下调巨噬细胞上TLR4的表达抑制内毒素诱导的爆发性肝损伤首先，我们发现低剂量TLR3配基(poly I：C)预处理小鼠能减轻LPS／D-GalN联合注射诱导的爆发性肝损伤。LPS／D-GalN联合注射引起的小鼠高死亡率、血清中转氨酶和TNF-α水平大幅升高及大片肝细胞坏死在poly I：C预处理后得到显著改善，证明poly I：C能减轻内毒素诱导的肝脏损伤。通过细胞清除和细胞转输实验，我们发现分别清除体内NK细胞、NKT细胞、αβT细胞和γδT细胞均不能影响poly I：C对肝脏损伤的保护效果，这就证明NK细胞、NKT细胞和T细胞在此过程中不起作用；然而，给清除巨噬细胞的小鼠转输poly I：C预先处理过的腹腔巨噬细胞能有效抑制肝脏损伤发生，表明poly I：C是直接作用于巨噬细胞，从而实现对肝损伤的保护。同时，实验结果显示poly I：C注射能够下调巨噬细胞表面LPS受体TLR4的表达并影响其下游炎症信号的活化。Poly I：C体内和体外处理均能下调小鼠肝脏巨噬细胞表面TLR4的表达，同样的结果也在巨噬细胞系RAW264.7细胞上得到验证。进一步实验表明，poly I：C体外处理RAW264.7细胞能抑制LPS／TLR4下游信号分子ERK1／2、p38MAPK、SAPK／JNK和NF-κB的活化。此外，anti-TLR3抗体能阻断poly I：C对巨噬细胞表面TLR4的下调作用，提示poly I：C通过TLR3通路影响TLR4的表达。TLR9配基募集和活化肝脏NKT细胞从而加重Con A诱导的小鼠急性肝损伤本实验中我们发现TLR9的配基C_pG ODN处理后，小鼠肝脏NKT细胞的数目和状态发生特异性变化：数目增加，细胞表面CD69和Fas L的表达上升，分泌细胞因子的能力和对肝细胞的天然杀伤能力增强。清除小鼠体内巨噬细胞后，C_pGODN对肝脏NKT细胞的作用被明显削弱。同时，C_pG ODN处理过的巨噬细胞及其细胞上清都可以增强肝脏NKT细胞对肝细胞的杀伤。进一步的实验表明，anti-IL-12中和性抗体能够抑制这种效果。这些结果提示我们巨噬细胞对肝脏NKT细胞的作用依赖细胞间接触和可溶性因子的共同作用。基于C_pG ODN对肝脏NKT细胞的特殊作用，我们观察了C_pG ODN对Con A诱导的小鼠急性肝损伤模型的影响。我们发现C_pG ODN预注射能加重Con A诱导的小鼠急性肝损伤。转氨酶、组织病理和血清中炎症性细胞因子的结果均显示C_pG ODN预处理组中肝脏损伤明显加重；而且C_pG ODN预处理也能增强Con A注射后肝脏NKT细胞分泌细胞因子的能力。综上实验结果表明(1)Poly I：C通过TLR3下调小鼠肝脏巨噬细胞表面LPS受体TLR4的表达，从而影响TLR4下游炎症信号的活化，并抑制了LPS／D-GalN联合注射诱导的巨噬细胞介导的小鼠爆发性肝损伤：(2)TLR9配基通过巨噬细胞，不仅能增加肝脏NKT细胞的数目，促进细胞的活化，还能增强肝脏NKT细胞的天然杀伤能力，进而加重Con A诱导的NKT细胞介导的小鼠急性肝损伤。由此可见，肝脏的Toll样受体具有双向调节功能，在不同的病理过程中发挥不同的作用。此项研究将有利于从细胞及分子水平上研究自身免疫性肝损伤的致病机制，从而更好地为临床治疗和药物开发提供理论依据。