随着抗生素的不断开发及广泛应用,细菌耐药性的产生和传播问题也日益成为研究的重点。以往对细菌耐药性产生和传播的机制研究着重在耐药性质粒和转座子,而近年来,整合子——耐药基因盒系统已得到了研究者们的广泛认同和关注,越来越多的证据表明其与临床多重耐药菌株的产生有着密切的关系。铜绿假单胞菌现以成为院内感染的重要致病因子,出现了大量该菌属的耐药株。本论文主要研究临床分离的铜绿假单胞菌的整合子——耐药基因盒系统。 在此课题研究中,收集了广州市华侨医院2001年～2004年间的临床分离的铜绿假单胞菌95株。对其进行常用抗生素耐药性分析,结果表明所有菌株对至少三种抗生素产生耐药,且大部分的菌株(92/95)对至少三种或以上的抗菌药物产生耐药。应用多重PCR的方法对95株菌株进行第一,二和三类整合酶基因检测,发现其中的48株菌株获得了一类整合酶的扩增条带,9株获得了二类整合酶扩增条带,1株同时获得一类和二类整合酶基因的扩增条带,未检测出第三类整合酶基因。 应用引物in-F/in-B和ti-F/ti-B对整合子可变区进行耐药基因盒扩增分析,结果表明,一类整合酶阳性菌株中有8株得到2360bp片段,2株得到1664bp片段,22株得到1913bp片段,12株得到975bp片段,1株得到2655bp片段,1株得到1913bp+1664bp两个片段,1株得到的是1913bp+975bp两个片段；二类整合酶阳性菌株均得到2400bp片段；而1株同时携带一类和二类整合酶的菌株扩增得到的是1913bp片段。对这些基因盒片段进行分析发现,2360bp片段的基因盒含有aacA4和cmlA1耐药基因,与氨基糖苷类抗生素耐药相关；1664bp片段含有dfrl7和aadA5耐药基因,其中dfrl7与磺胺类药物耐药相关；1913bp片段含有dhfr ⅩⅡ,orfF和aadA2耐药基因,2655bp片段含有aacA4,catB3和dfrA Ⅰ耐药基因,其中catB3与氯霉素耐药相关；975bp含有aadA2耐药基因；2400bp含有dfr1,sat1和aadA1耐药基因,其中sat1与四环素耐药相关。将片段大小相同的扩增产物,经限制性酶酶切分析,确认为同一扩增产物。 此外,应用肠杆菌间重复序列PCR(ERIC-PCR)对58株整合酶阳性的菌株进行基因分型。结果显示58株整合子阳性菌株可以分为8种不同的基因型。整合子结构与基因型之间有着一定的关系。 本研究中2001年～2004年间95株临床分离的铜绿假单胞菌,对其整合酶基因,耐药基因盒和基因型的分析都显示出多样化的趋势,提示了在医院内抗生素的广泛应用的情况下,整合子介导的铜绿假单胞菌耐药性水平传播的日益严重。本论文较为系统的分析了临床分离的铜绿假单胞菌整合子结构及其介导的细菌耐药性,提示我们应该注意对细菌中整合子介导的耐药基因水平转移进行有效的监测；同时本论文的数据为耐药基因传播的研究和控制致病菌耐药表达提供了研究思路。