丛枝菌根（Arbuscular mycorrhiza,AM）真菌可作为天然菌肥和生防制剂,具有促进植物对土壤矿质养分的吸收、增强植物抗逆性和抗病性、改善土壤结构和修复土壤中的重金属污染等功能,在农（林）业生产和应用中具有广泛的前景。由于AM真菌具有专性共生的特性,必须依靠寄主植物完成生命周期,这使得AM真菌菌剂在规模化生产中受到了严重的限制。本研究建立了5种烟草、颠茄植物毛状根与AM真菌（柯氏无梗囊霉Acaulospora koskei）离体双重培养体系;构建了发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）遗传转化烟草、颠茄植物产生毛状根、AM真菌孢子的表面消毒方法,并且也研究了柯氏无梗囊霉孢子萌发、菌丝生长条件、结构变化及整个发育过程,获得了AM真菌繁殖体。研究结果为AM真菌规模化生产纯净菌剂、AM真菌资源的利用和保存种质资源提供一种有效方法。试验结果如下:1.无菌苗的获得:烟草（K326、K87、Va116、NC82、毕纳1号）和颠茄种子在75%酒精中浸泡1 min,10%次氯酸钠中浸泡15 min,接种在MS固体培养基上,于25°C、14 h/d光照培养,获得无菌幼苗。2.毛状根的诱导:采用发根农杆菌C58C1对5种烟草（K326、K87、Va116、NC82、毕纳1号）和颠茄无菌苗叶片侵染,通过抑菌、除菌培养获得毛状根,其诱导率为NC82（83.33%）＞颠茄（63.33%）＞K87（60.00%）＞毕纳1号（56.67%）＞Va116（53.33%）＞K326（43.33%）。通过形态学和分子生物学手段检测,证明其诱导的6种毛状根为Ri T-DNA转化根,且采用固体和液体两种培养方式对毛状根进行继代培养,得出液体培养比固体培养基更有利于毛状根的生长。3.孢子鉴定及萌发:采用湿筛倾析-蔗糖离心法从土壤中分离AM真菌孢子,经形态学鉴定为柯氏无梗囊霉。柯氏无梗囊霉孢子最佳消毒时间是A液10 min、和B液10 min;在水琼脂培养基萌发最佳p H为6.0;在独脚金内酯GR24 450pg/L和精胺SPM 40 mg/L时萌发效果最好,萌发率分别为61.67%、58.34%。对萌发的孢子进行分子生物学鉴定,通过建立系统发育树,进一步证明萌发的孢子为柯氏无梗囊霉。4.双重培养体系的建立:将诱导的6种植物毛状根与柯氏无梗囊霉建立双重培养体系,结果发现只有烟草Va116毛状根与柯氏无梗囊霉成功建立双重培养体系,产生了新生孢子,新形成的孢子最初呈乳白色,直径大约为20-40μm,孢子成熟时为棕黑色,直径大约40-60μm。通过菌根侵染观察到入侵点、根外菌丝和根内菌丝的分布、泡囊结构的形成以及根内孢子,进一步确认了双重培养体系的成功建立。本试验建立了5种烟草（K326、K87、Va116、NC82、毕纳1号）和颠茄稳定的Ri T-DNA毛状根诱导体系,获得了大量的毛状根,为后期双重培养体系的建立提供了良好的宿主材料;探究了柯氏无梗囊霉孢子萌发最优的条件,获得了大量无菌萌发的孢子;成功建立了烟草Va116毛状根与柯氏无梗囊霉的双重培养体系,产生了新生孢子,记录了根外菌丝和根内菌丝的形态特征、泡囊结构的形成以及孢子发育和生长过程。