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本研究采用氧化酸解法成功制备了氧化魔芋葡甘露聚糖(OKGM)及其酸解产物(A-OKGM),并对二者进行了特性分析;选取450尾鱼,进行为期60天的饲养试验,首先考察了较高剂量(4.0、8.0、]6.0、32.0 g/kg)的OKGM对齐口裂腹鱼肠道性能及肠道菌群的影响;进一步再在齐口裂腹鱼饲料中不添加、添加8.0、16.0、32.0 g/kg的OKGM及添加8.0、16.0、32.0 g/kg的A-OKGM,共选取840尾,进行了2批为期60天的饲养试验;通过饲养试验研究了不同水平的OKGM及A-OKGM对齐口裂腹鱼生长性能的影响:通过饲养试验和攻毒试验研究了不同水平的OKGM及A-OKGM对齐口裂腹鱼免疫性能的影响;克隆了齐口裂腹鱼IL-1β、TNF-α和TLR22基因片段,并通过饲养试验考察了不同水平的OKGM及A-OKGM对其头肾、中肾、脾脏和肠道IL-1β、TNF-α和TLR22基因表达的影响;60天饲养试验结束后,对齐口裂腹鱼腹腔注射嗜水气单胞菌,考察感染6h后免疫性能及头肾、中肾、脾脏和肠道中IL-1β、TNF-α和TLR22基因表达情况;克隆了齐口裂腹鱼LPL和FAS基因片段,并通过饲养试验考察了不同水平的OKGM及A-OKGM对齐口裂腹鱼脂肪含量及肝脏和肌肉中LPL和FAS基因表达的影响。研究结果如下:1.HCl酸解法显著降低了OKGM的特性粘度,OKGM和A-OKGM的特性粘度分别为822.82 cm3/g和46.55 cm3/g,通过Mark-Houwink公式推算,二者的粘均分子量分别为4.7×105Da和9.2x103Da;从扫描电镜结果来看,KGM表面呈鳞片状,有明显的平行条状褶皱,OKGM颗粒表面显得平整致密,而A-OKGM表面粗糙,酸腐蚀现象较为明显。从DSC热特征分析结果表明,经H202氧化后的OKGM热稳定性与KGM相差不大,而经HCl酸解处理得到的A-OKGM,热稳定性明显低于KGM和OKGM;红外光谱分析结果表明,利用盐酸降解氧化魔芋葡甘露聚糖,并不会改变魔芋葡甘露聚糖的主链结构。2.日粮中添加16.0 g kg-1 OKGM会显著提高齐口裂腹鱼前肠黏膜褶皱高度(P<0.05),而日粮中添加4.0 g kg-1-32.0 g kg-1 OKGM会不同程度的提高中肠和后肠黏膜褶皱高度(P<0.05)。8.0-32.0 g kg-1 OKGM组前肠黏膜上皮高度显著高于对照组(P<0.05),在中肠,8.0和16.0 g kg-1 OKGM组黏膜上皮高度显著提高(P<0.05),在后肠中,各OKGM组的黏膜上皮高度均显著高于对照组(P<0.05)。从黏膜下层厚度可以看到,在前肠中,OKGM组均显著高于对照组(P<0.05),在中肠中,4.0-16.0 g kg-1 OKGM组显著高于对照组(P<0.05),而后肠中8.0 g kg-1和16.0 gkg-’组显著高于对照组(P<0.05)。第4.0和8.0 g kg-1 OKGM组前肠和中肠外纵肌层厚度显著高于对照组(P<0.05)。各OKGM组前肠内环肌层厚度均显著高于对照组(P<0.05),4.0和8.0 g kg-1 OKGM中肠内环肌层厚度显著增加(P<0.05),此外,第8.0 g kg-1 OKGM组后肠内环肌层厚度也显著提高(P<0.05)。与对照组相比,32.0 g kg-1 OKGM组前肠杯状细胞显著低于对照组(P<0.05),而在中肠和后肠,各组与对照组差异不显著(P>0.05)。从聚类分析可以看出,4.0和8.0 g kg-1 OKGM组先聚为一类,再和16.0 g kg-1 OKGM组聚到一类,然后和32.0 g kg-1 OKGM组聚为一类,最后与对照组聚到一起。对照组肠道菌群多样性指数显著低于OKGM组(P<0.05),而其余各组差异不显著(P>0.05)。3.与对照组相比,在齐口裂腹鱼日粮中添加8.0 g kg-1的A-OKGM显著(P<0.05)增加了齐口裂腹鱼的增重率、特定生长率和蛋白质效率,显著降低了饵料系数(p<0.05),其余各组的生长性能指标与对照组差异不显著(P>0.05)。日粮中添加OKGM和A-OKGM对齐口裂腹鱼头肾指数、中肾指数、脾体指数、肠长指数及肠体指数无显著影响;8.0 g kg-1 A-OKGM组的血清溶菌酶活性显著高于(P<0.05)对照组,而16.0 g kg-1 A-OKGM组血清溶菌酶活性极显著高于(P<0.01)对照组,8.0 g kg-1 OKGM组血清补体C3含量显著高于(P<0.05)对照组,8.0 g kg-’和16.0 g kg-1 A-OKGM组血清补体C3含量极显著高于(P<0.01)对照组;第5、6、7组血清IgM含量极显著高于(P<0.01)对照组;32.0 g kg-1 OKGM组和8.0 g kg-1A-OKGM组血清SOD活性极显著高于(P<0.01)对照组,8.0 g kg-1和16.0 g kg-1OKGM组和16.0 g kg-1 A-OKGM组血清SOD活性显著高于(P<0.05)对照组;各试验组血清MDA含量极显著低于(P<0.01)对照组;各试验组血清GSH-Px舌性差异不显著(P>0.05);攻毒后第2天后和第10天后,各组成活率差异不显著(P>0.05),攻毒第6天后,8.0 g kg-1 A-OKGM组的成活率显著高于(P<0.05)对照组,攻毒第14天后,8.0 g kg-1 A-OKGM组的成活率极显著高于(P<0.01)对照组,其中,对照组的成活率最低。4.克隆了齐口裂腹鱼IL-1β、TNF-α及TLR22基因的部分片段,其片段大小分别为120bp、116bp和174bp,编码39、38和58个氨基酸;32.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1 16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM组脾脏IL-1p表达量显著(P<0.05)高于对照组,8.0 g kg-1 A-OKGM组头肾IL-]p表达量显著(P<0.05)高于对照组,8.0 g kg-1 OKGM组和16.0 g kg-1 A-OKGM组肠道IL-1β表达量显著(P<0.05)高于对照组,中肾中各组IL-1β表达量差异不显著(P>0.05);16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM组脾脏TNF-α的表达量显著(P<0.05)高于对照组,32.0 g kg-1OKGM组和8.0 g kg-1 A-OKGM组头肾中TNF-α的表达量显著高于(P<0.05)对照组,与对照组相比,8.0 g kg-1 OKGM组中肾TNF-α的表达量显著上调(P<0.05),其余各组差异不显著(P>0.05),肠道中,32.0g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达量显著高于(P<0.05)对照组;在脾脏和中肾中,16.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22mRNA的表达量显著高于(P<0.05)对照组,8.0 g kg-1 A-OKGM组头肾TLR22的表达量显著高于(P<0.05)对照组,而与对照组相比,各组肠道TLR22表达量差异不显著(P>0.05)。5.嗜水气单胞菌感染6h后,头肾中,各组IL-1β的表达量上调,除对照组外,其他6个组差异达显著水平(P<0.05),在中肾中,8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 A-OKGM组IL-1β表达量显著(P<0.05)上调,32.0 g kg-1OKGM组及8.0 g kg-1、16.0 g kg-1和32.0 g kg-1 A-OKGM组脾脏IL-1β表达量显著(P<0.05)上调,而在肠道中,8.0 g kg-1、16.0 g kg-1和32.0 g kg-1 OKGM组和16.0 g kg-1 A-OKGM组IL-1β的表达量显著(P<0.05)上调;感染嗜水气单胞菌6 h后,32.0 g kg-1 OKGM组和16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM组头肾中TNF-α表达量显著上调(P<0.05),中肾中,8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 OKGM组和8.0g kg-1、16.0 g kg-1、32.0g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达显著上调(P<0.05),而在脾脏中,仅8.0 g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达量显著上调(P<0.05),肠道中,8.0 g kg-1、16.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1、16.0 g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达量显著上调(P<0.05);感染嗜水气单胞菌6 h后,32.0 g kg"1 OKGM组和8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 A-OKGM组头肾TLR22表达量显著上调(P<0.05),在中肾中,对照组、8.0 g kg-1、16.0 g kg-1和32.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22的表达显著上调(P<0.05),在脾脏中,8.0 g kg-1、16.0 g kg-1、32.0 g kg-1 OKGM组和8.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22的表达量显著上调(P<0.05),肠道中,对照组、8.0 gkg-1、16.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1、16.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22的表达量显著上调(P<0.05)。日粮中添加8.0 g kg-1 A-OKGM能显著增强感染嗜水气单胞菌齐口裂腹鱼血清补体C3含量和溶菌酶活性(P<0.05)。6.利用设计的LPL及FAS引物,分别扩增出了512bp的LPL cDNA片段(GenBank序列号:KF738266)及524bp的FAS cDNA片段(GenBank序列号:KF738265),其中,所得LPL cDNA片段编码170个氨基酸,而FAS cDNA片段编码174个氨基酸;8.0 gkg-1和32.0 g kg-1 A-OKGM组背肌粗脂肪含量显著高于(P<0.05)对照组,16.0 g kg-1 OKGM组的腹肌脂肪含量显著低于(P<0.05)对照组;8.0 g kg-1 A-OKGM组肝脏LPL基因的表达量显著高于(P<0.05)对照组,而肌肉中各试验组LPL mRNA表达量与对照组相比差异不显著(P>0.05);各试验组肝脏和肌肉FAS mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。因此,我们得出如下结论:1.采用盐酸降解OKGM,不会改变KGM的主链结构,且能显著降低其特性粘度,获得低分子量OKGM,制备方法切实可行。2.日粮中添加4.0-32.0 g kg-1 OKGM能有效改善齐口裂腹鱼的肠道形态,调节肠道菌群,其中,16.0 gkg-1效果最为显著。3.在齐口裂腹鱼日粮中添加8.0 g kg-1-32.0 g kg-1的OKGM或A-OKGM均能不同程度地提高生长性能,增强齐口裂腹鱼的免疫活性和抗氧化性能,提高攻毒后鱼的成活率,其中,8.0 g kg-1 A-OKGM组作用最为显著。4.日粮中添加OKGM和A-OKGM会上调齐口裂腹鱼IL-1β、TNF-α和TLR22基因在头肾、中肾、脾脏和肠道中的表达,其中,8.0 g kg-1和16.0 g kg-1A-OKGM最为显著。5.日粮中添加OKGM和A-OKGM能不同程度的上调感染嗜水气单胞菌齐口裂腹鱼头肾、中肾、脾脏和肠道中IL-1β、TNF-α和TLR22的表达;日粮中添加8.0 g kg-1 A-OKGM能显著增强感染嗜水气单胞菌齐口裂腹鱼血清补体C3含量和溶菌酶活性。6.日粮中添加OKGM和A-OKGM会在一定程度上影响齐口裂腹鱼体脂肪含量;日粮中添加8.0 g kg-1 A-OKGM显著上调了齐口裂腹鱼肝脏LPL基因的表达,但日粮中添加OKGM和A-OKGM对齐口裂腹鱼肝脏和肌肉FAS基因的表达无显著影响。