酸解氧化魔芋葡甘露聚糖免疫及脂质代谢调节机理研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:ceolq
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究采用氧化酸解法成功制备了氧化魔芋葡甘露聚糖(OKGM)及其酸解产物(A-OKGM),并对二者进行了特性分析;选取450尾鱼,进行为期60天的饲养试验,首先考察了较高剂量(4.0、8.0、]6.0、32.0 g/kg)的OKGM对齐口裂腹鱼肠道性能及肠道菌群的影响;进一步再在齐口裂腹鱼饲料中不添加、添加8.0、16.0、32.0 g/kg的OKGM及添加8.0、16.0、32.0 g/kg的A-OKGM,共选取840尾,进行了2批为期60天的饲养试验;通过饲养试验研究了不同水平的OKGM及A-OKGM对齐口裂腹鱼生长性能的影响:通过饲养试验和攻毒试验研究了不同水平的OKGM及A-OKGM对齐口裂腹鱼免疫性能的影响;克隆了齐口裂腹鱼IL-1β、TNF-α和TLR22基因片段,并通过饲养试验考察了不同水平的OKGM及A-OKGM对其头肾、中肾、脾脏和肠道IL-1β、TNF-α和TLR22基因表达的影响;60天饲养试验结束后,对齐口裂腹鱼腹腔注射嗜水气单胞菌,考察感染6h后免疫性能及头肾、中肾、脾脏和肠道中IL-1β、TNF-α和TLR22基因表达情况;克隆了齐口裂腹鱼LPL和FAS基因片段,并通过饲养试验考察了不同水平的OKGM及A-OKGM对齐口裂腹鱼脂肪含量及肝脏和肌肉中LPL和FAS基因表达的影响。研究结果如下:1.HCl酸解法显著降低了OKGM的特性粘度,OKGM和A-OKGM的特性粘度分别为822.82 cm3/g和46.55 cm3/g,通过Mark-Houwink公式推算,二者的粘均分子量分别为4.7×105Da和9.2x103Da;从扫描电镜结果来看,KGM表面呈鳞片状,有明显的平行条状褶皱,OKGM颗粒表面显得平整致密,而A-OKGM表面粗糙,酸腐蚀现象较为明显。从DSC热特征分析结果表明,经H202氧化后的OKGM热稳定性与KGM相差不大,而经HCl酸解处理得到的A-OKGM,热稳定性明显低于KGM和OKGM;红外光谱分析结果表明,利用盐酸降解氧化魔芋葡甘露聚糖,并不会改变魔芋葡甘露聚糖的主链结构。2.日粮中添加16.0 g kg-1 OKGM会显著提高齐口裂腹鱼前肠黏膜褶皱高度(P<0.05),而日粮中添加4.0 g kg-1-32.0 g kg-1 OKGM会不同程度的提高中肠和后肠黏膜褶皱高度(P<0.05)。8.0-32.0 g kg-1 OKGM组前肠黏膜上皮高度显著高于对照组(P<0.05),在中肠,8.0和16.0 g kg-1 OKGM组黏膜上皮高度显著提高(P<0.05),在后肠中,各OKGM组的黏膜上皮高度均显著高于对照组(P<0.05)。从黏膜下层厚度可以看到,在前肠中,OKGM组均显著高于对照组(P<0.05),在中肠中,4.0-16.0 g kg-1 OKGM组显著高于对照组(P<0.05),而后肠中8.0 g kg-1和16.0 gkg-’组显著高于对照组(P<0.05)。第4.0和8.0 g kg-1 OKGM组前肠和中肠外纵肌层厚度显著高于对照组(P<0.05)。各OKGM组前肠内环肌层厚度均显著高于对照组(P<0.05),4.0和8.0 g kg-1 OKGM中肠内环肌层厚度显著增加(P<0.05),此外,第8.0 g kg-1 OKGM组后肠内环肌层厚度也显著提高(P<0.05)。与对照组相比,32.0 g kg-1 OKGM组前肠杯状细胞显著低于对照组(P<0.05),而在中肠和后肠,各组与对照组差异不显著(P>0.05)。从聚类分析可以看出,4.0和8.0 g kg-1 OKGM组先聚为一类,再和16.0 g kg-1 OKGM组聚到一类,然后和32.0 g kg-1 OKGM组聚为一类,最后与对照组聚到一起。对照组肠道菌群多样性指数显著低于OKGM组(P<0.05),而其余各组差异不显著(P>0.05)。3.与对照组相比,在齐口裂腹鱼日粮中添加8.0 g kg-1的A-OKGM显著(P<0.05)增加了齐口裂腹鱼的增重率、特定生长率和蛋白质效率,显著降低了饵料系数(p<0.05),其余各组的生长性能指标与对照组差异不显著(P>0.05)。日粮中添加OKGM和A-OKGM对齐口裂腹鱼头肾指数、中肾指数、脾体指数、肠长指数及肠体指数无显著影响;8.0 g kg-1 A-OKGM组的血清溶菌酶活性显著高于(P<0.05)对照组,而16.0 g kg-1 A-OKGM组血清溶菌酶活性极显著高于(P<0.01)对照组,8.0 g kg-1 OKGM组血清补体C3含量显著高于(P<0.05)对照组,8.0 g kg-’和16.0 g kg-1 A-OKGM组血清补体C3含量极显著高于(P<0.01)对照组;第5、6、7组血清IgM含量极显著高于(P<0.01)对照组;32.0 g kg-1 OKGM组和8.0 g kg-1A-OKGM组血清SOD活性极显著高于(P<0.01)对照组,8.0 g kg-1和16.0 g kg-1OKGM组和16.0 g kg-1 A-OKGM组血清SOD活性显著高于(P<0.05)对照组;各试验组血清MDA含量极显著低于(P<0.01)对照组;各试验组血清GSH-Px舌性差异不显著(P>0.05);攻毒后第2天后和第10天后,各组成活率差异不显著(P>0.05),攻毒第6天后,8.0 g kg-1 A-OKGM组的成活率显著高于(P<0.05)对照组,攻毒第14天后,8.0 g kg-1 A-OKGM组的成活率极显著高于(P<0.01)对照组,其中,对照组的成活率最低。4.克隆了齐口裂腹鱼IL-1β、TNF-α及TLR22基因的部分片段,其片段大小分别为120bp、116bp和174bp,编码39、38和58个氨基酸;32.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1 16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM组脾脏IL-1p表达量显著(P<0.05)高于对照组,8.0 g kg-1 A-OKGM组头肾IL-]p表达量显著(P<0.05)高于对照组,8.0 g kg-1 OKGM组和16.0 g kg-1 A-OKGM组肠道IL-1β表达量显著(P<0.05)高于对照组,中肾中各组IL-1β表达量差异不显著(P>0.05);16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM组脾脏TNF-α的表达量显著(P<0.05)高于对照组,32.0 g kg-1OKGM组和8.0 g kg-1 A-OKGM组头肾中TNF-α的表达量显著高于(P<0.05)对照组,与对照组相比,8.0 g kg-1 OKGM组中肾TNF-α的表达量显著上调(P<0.05),其余各组差异不显著(P>0.05),肠道中,32.0g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达量显著高于(P<0.05)对照组;在脾脏和中肾中,16.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22mRNA的表达量显著高于(P<0.05)对照组,8.0 g kg-1 A-OKGM组头肾TLR22的表达量显著高于(P<0.05)对照组,而与对照组相比,各组肠道TLR22表达量差异不显著(P>0.05)。5.嗜水气单胞菌感染6h后,头肾中,各组IL-1β的表达量上调,除对照组外,其他6个组差异达显著水平(P<0.05),在中肾中,8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 A-OKGM组IL-1β表达量显著(P<0.05)上调,32.0 g kg-1OKGM组及8.0 g kg-1、16.0 g kg-1和32.0 g kg-1 A-OKGM组脾脏IL-1β表达量显著(P<0.05)上调,而在肠道中,8.0 g kg-1、16.0 g kg-1和32.0 g kg-1 OKGM组和16.0 g kg-1 A-OKGM组IL-1β的表达量显著(P<0.05)上调;感染嗜水气单胞菌6 h后,32.0 g kg-1 OKGM组和16.0 g kg-1和32.0g kg-1 A-OKGM组头肾中TNF-α表达量显著上调(P<0.05),中肾中,8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 OKGM组和8.0g kg-1、16.0 g kg-1、32.0g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达显著上调(P<0.05),而在脾脏中,仅8.0 g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达量显著上调(P<0.05),肠道中,8.0 g kg-1、16.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1、16.0 g kg-1 A-OKGM组TNF-α的表达量显著上调(P<0.05);感染嗜水气单胞菌6 h后,32.0 g kg"1 OKGM组和8.0 g kg-1、32.0 g kg-1 A-OKGM组头肾TLR22表达量显著上调(P<0.05),在中肾中,对照组、8.0 g kg-1、16.0 g kg-1和32.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22的表达显著上调(P<0.05),在脾脏中,8.0 g kg-1、16.0 g kg-1、32.0 g kg-1 OKGM组和8.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22的表达量显著上调(P<0.05),肠道中,对照组、8.0 gkg-1、16.0 g kg-1 OKGM组及8.0 g kg-1、16.0 g kg-1 A-OKGM组TLR22的表达量显著上调(P<0.05)。日粮中添加8.0 g kg-1 A-OKGM能显著增强感染嗜水气单胞菌齐口裂腹鱼血清补体C3含量和溶菌酶活性(P<0.05)。6.利用设计的LPL及FAS引物,分别扩增出了512bp的LPL cDNA片段(GenBank序列号:KF738266)及524bp的FAS cDNA片段(GenBank序列号:KF738265),其中,所得LPL cDNA片段编码170个氨基酸,而FAS cDNA片段编码174个氨基酸;8.0 gkg-1和32.0 g kg-1 A-OKGM组背肌粗脂肪含量显著高于(P<0.05)对照组,16.0 g kg-1 OKGM组的腹肌脂肪含量显著低于(P<0.05)对照组;8.0 g kg-1 A-OKGM组肝脏LPL基因的表达量显著高于(P<0.05)对照组,而肌肉中各试验组LPL mRNA表达量与对照组相比差异不显著(P>0.05);各试验组肝脏和肌肉FAS mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。因此,我们得出如下结论:1.采用盐酸降解OKGM,不会改变KGM的主链结构,且能显著降低其特性粘度,获得低分子量OKGM,制备方法切实可行。2.日粮中添加4.0-32.0 g kg-1 OKGM能有效改善齐口裂腹鱼的肠道形态,调节肠道菌群,其中,16.0 gkg-1效果最为显著。3.在齐口裂腹鱼日粮中添加8.0 g kg-1-32.0 g kg-1的OKGM或A-OKGM均能不同程度地提高生长性能,增强齐口裂腹鱼的免疫活性和抗氧化性能,提高攻毒后鱼的成活率,其中,8.0 g kg-1 A-OKGM组作用最为显著。4.日粮中添加OKGM和A-OKGM会上调齐口裂腹鱼IL-1β、TNF-α和TLR22基因在头肾、中肾、脾脏和肠道中的表达,其中,8.0 g kg-1和16.0 g kg-1A-OKGM最为显著。5.日粮中添加OKGM和A-OKGM能不同程度的上调感染嗜水气单胞菌齐口裂腹鱼头肾、中肾、脾脏和肠道中IL-1β、TNF-α和TLR22的表达;日粮中添加8.0 g kg-1 A-OKGM能显著增强感染嗜水气单胞菌齐口裂腹鱼血清补体C3含量和溶菌酶活性。6.日粮中添加OKGM和A-OKGM会在一定程度上影响齐口裂腹鱼体脂肪含量;日粮中添加8.0 g kg-1 A-OKGM显著上调了齐口裂腹鱼肝脏LPL基因的表达,但日粮中添加OKGM和A-OKGM对齐口裂腹鱼肝脏和肌肉FAS基因的表达无显著影响。
其他文献
生猪的生长环境一般相对而言会比较简陋,这就为细菌提供了很多的繁殖机会,再加上饲养的数量较为庞大,所以 非常容易使生猪在成长的过程中发生高热病,并且很容易传染,造成大面
针对深空探测任务特点给出了一种基于导航图像的探测器着陆点选择与探测器运动估计技术。考虑到在着陆初始阶段(探测器高度>2 km)导航相机所拍摄到的天体表面近似为平面。这里通过跟踪至少4个平面内的特征点在导航图像序列中的位置,利用最小二乘法计算单应矩阵,由该矩阵得到探测器部分相对运动参数。结合激光测距仪给出的探测器与天体表面之间的距离信息,可以得到全部6自由度参数。安全着陆点的选择与评估首先利用图像灰
超细铁红颜料经表面改性后在水中的分散稳定性能及其他性能得到显著提高。通过红外光谱、热分析、表面Zeta电位测试分析研究其改性作用 ,结果表明 :改性剂通过物理吸附和化学
馒头是我国传统食品,该文探讨小麦粉蛋白质、淀粉、脂质、酶及各种添加剂等组分对最终馒头品质特征影响;阐述馒头用粉对各种组分含量要求。
目的探讨对重症肌无力患者应用他克莫司进行治疗药物监测的临床必要性。方法采取LC-MS/MS法测定血浆中他克莫司的浓度,对2012年9月~2014年3月期间21例重症肌无力患者血浆他克
目的观察丙泊酚联合瑞芬太尼用于妇科腔镜麻醉的效果。方法ASAⅠ-Ⅱ级择期腹腔镜手术患者60例,随机分为两组进行比较。结果A组苏醒时间和拔管时间与对照组比较差异均有显著性(P
余度技术是提高惯性导航系统性能的一种重要手段。对微小型惯性组合导航系统中的惯性传感器多余度配置技术进行了研究,开发了MEMS惯性器件构成的微型余度配置惯导系统,分析了微
在初中物理教学中,约占五分之二的学生普遍存在物理成绩上不去的现象,作为实施者——教师,应该积极探究农村初中物理成绩上不去的原因以及如何提高学生的物理成绩.
摘要:在新时代,煤炭能源行业转型已成为一种新趋势,煤炭企业工会工作的重要性也随之提升。在煤炭企业中,工会女工是必不可少的存在,探索女工存在的问题、提高女工的综合素养,是煤炭
报纸