前言：　　 浸润、转移是恶性肿瘤的基本生物学特征,是导致恶性肿瘤患者死亡的关键因素。肿瘤转移相关基因(metastasisassociatedgene1,MTA1)是近年发现的与信号传导及基因调节有关的肿瘤转移相关基因。在多种恶性肿瘤组织中MTA1过表达与肿瘤的浸润转移密切相关。　　 VEGF血管内皮生长因子(VEGF)被认为是作用强,特异性高的调节血管生成的基因表达产物。是一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂原,是肿瘤新生血管生成的重要调控因子,不仅参与肿瘤血管生成、增殖,还直接与肿瘤浸润、转移有关。　　 E-cadherin基因位于人染色体16q22.1位点,是钙粘附家族中的一员,主要分布于各种上皮细胞中,是介导细胞之间及细胞与细胞外基质粘附的主要分子之一。当E-cadherin表达减弱或缺失时,细胞之间的粘附作用减弱,细胞较易分散,向外周浸润生长,一旦条件合适即脱离原发灶转移。　　 近期的研究发现,MTA1在促进细胞侵袭转移中起着重要的作用,本研究采用免疫细胞化学染色法检测MTA1蛋白,血管内皮生长因子VEGF,上皮型钙粘蛋白E-Cad在乳腺癌胸水中的表达情况,并与两者的相关临床病理特点以及三者之间的相关性进行分析,阐明其在乳腺癌侵袭转移方面的作用。　　 材料与方法：　　 一、材料　　 (一)临床资料　　 收集2009年12月至2011年2月中国医科大学附属第一医院门诊及病房有乳腺癌病史的恶性胸水患者标本,优选以肿瘤细胞为主、炎性细胞较少的60例作为研究对象(经细胞免疫化学及经组织学证实为乳腺癌细胞)以及相对应的原发灶组织作为对照并且复发期从3-16年不等,另外20例良性胸水标本作为对照,共计80例。　　 (二)细胞系　　 一种乳腺正常上皮细胞系MCF-10A和两种乳腺癌细胞系(MCF-7为低侵袭低转移癌细胞系,MDA-MB-435s为高侵袭高转移癌细胞系)购自北京协和基地医学院细胞中心。　　 (三)主要试剂　　 山羊抗人MTA1多克隆抗体购自美国santa公司,VEGF鼠抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技术开发公司,E-cadherin兔抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技术开发公司,DAB酶底物显色试剂盒和S-P超敏试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。　　 二、方法　　 (一)免疫细胞化学染色技术　　 采用链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(S-P)法行抗MTA1(1:150),VEGF(1:100),E-ca(1:100)免疫细胞化学染色。切片常规脱蜡至水,高温进行抗原修复,一抗4℃孵育过夜,DAB显色,苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照,用已知阳性乳腺癌切片做阳性对照。　　 (二)Westernblot技术　　 在20例胸水标本中检测MTA1,E-cadherin和VEGF的蛋白水平。总蛋白从胸水细胞中提取,冰上超声处理,4℃静置,孵育50min,4℃离心20min(800r/min),提取上清,放入-70℃冰箱里保存。使用前,用Brodford法测定蛋白浓度,以每孔80μg蛋白加入10%SDS-PAGE凝胶电泳后,4℃,50V(MTA1)、100V(E-cadherin)100v(VEGF)条件下湿电转移仪将蛋白转入0.22μmPVDF膜,5%脱脂奶粉封闭液封闭2h,一抗(MTA11:100稀释,VEGF1:100,E-cadherin1:1000稀释)4℃过夜,X底片曝光,显影,定影后拍照,以β-actin为内参,用凝胶成像及分析系统(BiolmagingSystems,美国)分析蛋白各条带的灰度值,每组结果均为相同条件重复3次。　　 三、统计学分析　　 应用SPSS16.0统计软件进行数据处理:采用X2检验(不满条件时用Fisher确切概率法)分析各组计数资料,采用Spearman等级相关分析MTA1蛋白与VEGF及E-cadherin蛋白组化表达的关系,采用t检验分析WesternBlot图像灰度值,并用LSD-t检验对各样本均数行两两比较,采用Pearson相关分析两指标Westernblot结果的相关性,P＜0.05为差异有统计学意义。　　 结果：　　 一、MTA1,VEGF,E-cadherin在胸水乳腺癌细胞中的表达　　 在60例胸水乳腺癌细胞中,MTA1阳性表达40例/60例(66.66%)定位于细胞核,VEGF阳性表达38例/60例(63.33%)主要定位于细胞浆,E-cadherin阳性表达34例/60例(57.78%)主要定位于细胞膜。统计学分析显示,MTA1蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关,与E-cadherin呈负相关,与乳腺癌肿块大小,组织学分级,临床分期,淋巴结转移有关。　　 二、MTA1,VEGKE-cadherin在乳腺癌细胞系中的表达　　 Westonblot检测,乳腺正常上皮细胞系MCF-IOA和乳腺癌细胞系MCF-7,MDA-MB-435s中MTA1和VEGF两种蛋白表达水平呈递增趋势,而E-cadherin蛋白表达水平则呈递减趋势。　　 结论：　　 MTA1与VEGF,与乳腺癌的浸润转移程度正相关,E-cadherin与乳腺癌的浸润转移程度呈负相关趋势。　　 MTA1与VEGF的高表达以及E-cadherin的低表达与乳腺癌组织学分级,临床分期,淋巴结转移有关。