一、研究背景:原发性肝癌作为我国最常见的恶性肿瘤之一,其目前首选的治疗方式为手术切除。但是,我国的大部分患者有乙肝病毒感染及肝硬化背景,肝脏储备能力较差,适合手术的患者数量少,即使早期手术切除的小肝癌,远期预后仍很差。近年来分子靶向治疗的出现,带来了肝癌治疗的新革命,分子靶向治疗具有高选择性、高敏感性及高效性等特点,逐渐成为了原发性肝癌治疗的一个重要手段。二、研究目的:本研究旨在探讨2,4-喹唑啉类衍生物对人肝细胞肝癌细胞和人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;对粘附能力的影响;对迁移侵袭能力的影响;对鸡胚尿嚢膜血管网生长的影响,通过研究2,4-喹唑啉类衍生物对内皮细胞以及肿瘤细胞的作用,分析2,4-喹唑啉类衍生物衍生物抑制原发性肝癌血管生成的作用机制。三、研究方法:1采用MTT法,观察2,4-喹唑啉类衍生物对人肝细胞肝癌细胞株(Hep G-2,SMMC-7721)和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖能力的影响;2采用内皮细胞细胞外基质黏附实验,观察2,4喹唑啉类衍生物对人肝癌细胞株(Hep G-2,SMMC-7721)和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)粘附能力的影响;3采用划痕实验,观察2,4-喹唑啉类衍生物对人肝癌细胞株(Hep G-2,SMMC-7721)和人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)迁移、侵袭能力的影响;4利用鸡胚尿囊膜实验(CAM)模型,研究2,4-喹唑啉类衍生物对血管新生的影响。5采用VEGFR2激酶抑制实验,筛选出抑制血管内皮生长因子受体2(VEGR2)能力最强的抑制剂6RT-PCR检测化合物11d对肝癌细胞VEGFm RNA表达的影响7WB检测化合物11d作用于人脐静脉血管内皮细胞HUVEC及肝癌细胞Hep G-2后血管内皮生长因子(VEGF)下游信号通路AKT/m TOR/P70S6K的影响。四、研究结果:1.MTT实验结果表明:这15种2,4-喹唑啉衍生物全都具有较强的体外抗肝癌细胞毒性,对这两种肝癌细胞株都有较好的抑制能力,而对人脐静脉血管内皮细胞HUVEC细胞毒性相对较小。2.粘附实验表明:随着时间、浓度的增加,大部分的2,4喹唑啉类衍生物显示出对内皮细胞粘附胶原蛋白的数量明显较少,粘附的抑制率增加,其中化合物11d的抑制率最高。3.划痕实验结果表明,经2,4-喹唑啉类衍生物处理之后,人脐静脉血管内皮细胞HUVEC迁移数目明显减少,划痕区被重新覆盖的面积明显减少,而其中化合物11d的作用最明显。4.鸡胚尿囊膜实验(CAM)实验结果表明,2,4-喹唑啉类衍生物能显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长,其中化合物11d效果最佳。5.VEGFR2激酶抑制实验表明,所有的2,4-喹唑啉类衍生物均具有良好的抑制VEGFR2激酶的活性,其中化合物11d效果最佳。6.我们选取化合物11d作为后续实验所用药物,PCR结果显示化合物11d随着浓度的增加,显著降低了VEGFm RNA表达,表明化合物11d抑制肿瘤血管生成的作用可能是通过作用于VEGF来完成的。7.我们使用化合物11d作用于人脐静脉内皮细胞和肝癌细胞,发现化合物11d降低了AKT、m TOR、P70S6K蛋白的磷酸化水平。五、研究结论:1.2,4-喹唑啉类衍生物对人肝癌细胞株(Hep G-2,SMMC-7721)及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖具有抑制作用;2.2,4-喹唑啉类衍生物对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)粘附能力具有抑制作用;3.2,4-喹唑啉类衍生物对人肝癌细胞株及脐静脉内皮细胞迁移侵袭能力具有抑制作用;4.2,4-喹唑啉类衍生物可以抑制新生血管网的形成;5.化合物11d的抗肝癌血管生成的作用可能是通过作用于VEGF,影响下游信号通路AKT/m TOR/P70S6K来实现的。