奶牛乳房炎是奶牛养殖业中广泛传播的传染病之一,除了乳房炎导致的产奶量减少带来的经济损失外,微生物代谢产物尤其是毒素对食品的污染也是一个令人担忧的问题。乳房炎的发病率在不同的奶牛场之间存在差异,以至于引起乳房炎的主要病原菌也可能存在显著差异。对于乳房炎的治疗,抗生素通常是首选。然而,由于细菌耐药性的增加,抗生素治疗效果有限,并且微生物从动物种群向人类的水平转移也可能因抗生素耐药性而对公共卫生产生危害。为了制定有效的乳房炎防治措施,明确主要的乳房炎病原体和耐药性非常重要。本研究对陕西部分地区16个奶牛场88份乳房炎奶样进行了分离鉴定,对分离出的主要病原菌建立了一种多重PCR检测方法,并对其优势菌群凝固酶阴性葡萄球菌（Coagulase-negative staphylococci,CNS）进行了耐药性分析。本研究取得以下结果:1.对88份乳房炎乳样进行了分离鉴定,共得到15个属143株细菌。主要病原菌占总分离株的67.83%,依次包括葡萄球菌属（26.57%）、肠杆菌属（19.58%）、链球菌属（13.29%）以及克雷伯氏菌属（8.39%）。其中大肠埃希菌（14.69%）、肺炎克雷伯菌（7.69%）、金黄色葡萄球菌（6.29%）、无乳链球菌（5.59%）和凝固酶阴性葡萄球菌（20.28%）占较大的比例。2.分别针对大肠埃希菌的pho A基因、肺炎克雷伯菌khe基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和无乳链球菌的tuf基因,设计并合成了相应的引物,并通过优化反应条件,建立了四重PCR检测方法。试验结果表明,多重PCR试验特异性地检测了这4种病原菌;敏感性试验表明,对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和肺炎克雷伯菌基因组DNA的最低检测量依次为17.11、19.16、109.6、20.89 pg/μL;临床检测表明,该方法的阳性检出率比细菌分离检出率高,且两者的符合率高达94.3%。3.对分离出的凝固酶阴性葡萄球菌进行了药敏试验和耐药基因检测。结果显示,29株CNS对19种抗生素产生了不同程度的耐药性,且呈现多重耐药。对环丙沙星、诺氟沙星以及氟苯尼考较为敏感,其敏感性依次为69.0%、86.2%、86.2%;对林可霉素的耐药率达100%,其次对大环内脂类、磺胺类以及β-内酰胺类抗生素的耐药率较高,依次为86.2%、75.8%、48.3%。分离的29株CNS耐药基因dfr G、Blaz、Inu A、mec A阳性率在27.6%～55.2%之间,耐药基因msr B、erm C的阳性率在20.7%以下。耐药表型的阳性率与耐药基因的检出并不一致,说明CNS耐药机制复杂多样,不能根据耐药基因的有无来推断所有抗菌药物类别的表型耐药性。综上所述,本研究通过分析引起陕西部分地区奶牛场奶牛乳房炎主要病原菌种类,在此基础上建立了一种检测主要病原菌的四重PCR检测方法,并对比分析了优势菌群凝固酶阴性葡萄球菌耐药表型及耐药基因型之间的关系,为该地区奶牛乳房炎的防治提供了参考。