【摘 要】
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该文通过克隆转人生长激素基因(hGH)红鲤F代鱼中转植基因及相关的整合位点的顺序特征,转植基因在世代传递过程中的行为,以及外源基因何时能"内源化"等.该文针对显微注射法制备的转基因鱼的特点,将一种比较"质粒回收法"应用于转基因鱼的植基因克隆.主要研究内如下:1.建立和完善了回收转植基因的技术路线,从一尾具有快速生长效应的F代转基因红鲤基因组中回收了50个转植基因.2.用双酶切法对bamHI酶切基因
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该文通过克隆转人生长激素基因(hGH)红鲤F<,4>代鱼中转植基因及相关的整合位点的顺序特征,转植基因在世代传递过程中的行为,以及外源基因何时能"内源化"等.该文针对显微注射法制备的转基因鱼的特点,将一种比较"质粒回收法"应用于转基因鱼的植基因克隆.主要研究内如下:1.建立和完善了回收转植基因的技术路线,从一尾具有快速生长效应的F<,4>代转基因红鲤基因组中回收了50个转植基因.2.用双酶切法对bamHI酶切基因组DNA后所回收的转植基因进行分类,并构建了它们的酶切图谱.可将回蛋基因分为4种类型,其中一种(占回收基因总数的18﹪)与构建原代转基因鱼所用的外源基因结构相同, 其余3种在分子量大小、酶切种类和位置都发生了显著的变化. 3.对回收的2种类型转植基因侧翼顺序进行亚克隆和顺序测定,发现一种转植基因(II型)的侧翼带有宿主鲤鱼β-actin基因的5非翻译区顺序(5UTR),推测该拷贝转植基因的核心顺序位于宿主β-actin基因的5UTR,单拷贝整合或位于串连体侧翼;另一种转植基因(III型)侧翼顺序与小鼠tie2基因顺序同源, 并用PCR-Southern方法对一个侧翼片段地验证,从普通鲤鱼基因组中检出了相应的顺序.推测该转植基因以单拷贝形式整合于宿主类tie2基因的5侧翼区和内含子间.4.通过Southern杂交,结合不同酶切条件下转植基因的回收结果分析,证实了在实验鱼中,转植基因以串连体形式整合.5.对回收转植基因的技术关键进行了讨论,并提出了提高转植基因回收效率的技术措施.
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