肺癌严重威胁人类的健康和生命，其发病率和死亡率逐年增加，并且大多数肺癌患者发现时已属晚期，传统的治疗手段如手术、化疗和放疗等难以奏效。自杀基因疗法以直接杀伤肿瘤细胞为目的，而不考虑肿瘤复杂的分子机制，作用直接有效，具有临床应用前景。我们的前期研究证实，骨髓内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPCs）在体内能定向归巢至肿瘤，并参与肿瘤新生血管的建立。本研究拟构建自杀基因－嘧啶脱氨酶基因（CD基因）重组腺病毒并体外转染骨髓EPCs，将携带CD基因的EPCs输注到肺癌荷瘤裸鼠体内，以EPCs作为CD基因的治疗载体，将CD基因特异性地投送至肺癌组织中并有效表达胞嘧啶脱氨酶，在局部将无毒的前体药物5-氟胞嘧啶转化为细胞毒性物质5-氟尿嘧啶（5-FU），实现靶向治疗肺癌的目的，为探索新的肺癌治疗手段提供理论和实验依据。目的:分析体外SCID大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的分离及培养方法，以期为后续研究提供的实验基础。方法:通过密度梯度离心法分离出小鼠骨髓中的单个核细胞，种植于纤维粘连蛋白包被的培养板上，在血管内皮生长因子和重组人上皮细胞生长因子刺激下生长。观察内皮祖细胞的细胞形态，FITC-UEA-I、DiL、ac-LDL摄取率，流式检测常见细胞表面标记物的表达情况。结果:成功从SCID大鼠骨髓中分离出内皮祖细胞，内皮祖细胞呈铺路石样生长，内皮袓细胞能摄取FITC-UEA-I、Dil-ac-LDL且双阳性染色细胞无明显差异。结论:从SCID大鼠骨髓中分离内皮祖细胞是一种切实可行的方法，为进一步的实验提供理论基础和实验材料。目的:研究转染自杀基因（CD基因）的骨髓内皮祖细胞与肺癌细胞SPC-A1共培养时，给予前药5-FC后，观察对CD-EPCs对肺癌细胞杀伤作用。方法:用密度梯度离心法获得骨髓内皮祖细胞，转染自杀基因：胞嘧啶脱氨酶基因（CD基因）。以RT-PCR检测骨髓内皮祖细胞中CD基因的表达。观察给予不同前药5-FC时，转染细胞的存活率，野生型及转基因EPCs对5-FC敏感性和旁效应对肺癌细胞的杀伤效果检测。结果:真核细胞表达CD-DNA-TPC被成功的转染骨髓内皮祖细胞。经过RT-PCR检测，骨髓内皮祖细胞中CD基因为阳性。分别将转染CD基因的EPC-CD及未转染的EPC培养液中分别加入在给5-FC后，研究发现，当CD-DNA-TPC转染成功，CD基因在转基因内皮祖细胞中表达阳性；在不同浓度5-FC（0.01~1000μg/ml）作用下，转基因型内皮祖细胞存活率低于野生型内皮祖细胞，各组间差异具有统计学意义。然后将转基因的EPCs与人肺腺癌细胞系SPC-A1细胞分别按照下述比例进行混合培养24h：0:10、1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0，培养液中加入最终稀释浓度为100μg/ml的5-FC，继续培养72h后采用MTT方法检测细胞存活率和细胞生长抑制率，可造成整体细胞约45%的死亡。结论: EPCs转染自杀基因（CD基因）后，给予前体药物5-FC通过诱发细胞凋亡和旁观效应，可以杀死共培养的肺癌细胞SPC-A1。本部分研究显示了自杀基因CD/5-FC系统对肺癌细胞的体外杀伤作用目的:了解携带自杀基因CD的骨髓内皮袓细胞对肺癌裸鼠皮下移植瘤的生长抑制及凋亡的情况，探索转染自杀基因的骨髓内皮祖细胞（CD-EPCs）用于肺癌靶向治疗的可行性。方法:3-5周龄BALB/C小鼠随机分为4组，每组各30只（n=30）。各组动物给予皮下注射1ml SPCA-1细胞悬液，各组动物于细胞移植3天后给予经鼠尾静脉分别给予不同的细胞移植：A转基因EPCs移植组；B EPCs（未转染）移植组；C CD基因重组腺病毒组； D空白对照组。第7天开始经鼠尾静脉给予前体药物5-FC（10mg/500μL），1次/d×7d，观察各组移植瘤体积、重量变化，计算抑瘤率。Tunel法检测肿瘤组织中的细胞凋亡率。剩余每组各15只动物继续喂养3-6月，记录动物死亡时间并绘制各组动物的生存曲线。结果: C组（CD-EPCs组）肿瘤体积、肿瘤明显小于其他组(p<0.05)；通过Tunel法检测发现CD-EPCs组的细胞凋亡率为25.28±3.12%，明显高于其他组(p<0.05)。各组生存时间无明显差异性(p＞0.05)。结论:骨髓内皮袓细胞可以成为肺癌靶向治疗的载体，转染自杀基因（CD）的骨髓内皮祖细胞抑瘤效果明显，是肺癌基因治疗的一种新的思路。