鹅膏毒肽是野生毒磨菇产生的主要毒素,常引起人和动物的中毒与死亡,尤其是在中国,每年都有很多消费者因为毒蘑菇而导致中毒死亡。在全球,大约有2000多种能够确定的食用菌类,其中有50多种有毒性。α-鹅膏毒肽是鹅膏菌属中引起动物和人类中毒死亡的主要毒素,致死量仅为5 mg/50 Kg体重。它是一种八肽化合物,在生物学研究中是作用于真核RNA聚合酶Ⅱ的特异性抑制剂。目前,一些直接蛋白质检测测定法可用于检测α-鹅膏毒肽,但这些方法大都是由于操作比较复杂、仪器昂贵、易发生交叉污染而有一定的局限性。近些年来,核酸适配体已被作为生物识别配体的替代品而广泛运用于各个方面。它能够通过体外合成,并通过高亲和力和特异性结合到靶分子上,其结合范围宽至从大分子如蛋白质、ATP、氨基酸到阳离子等简单的有机小分子。核酸适配体是通过指数富集的配体进化(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技术通过体外合成筛选产生的。该技术包括一系列的重复筛选过程,最终筛选得到一组与靶分子强特异性高亲和力结合的核酸适配体。这些核酸适配体可特异性识别靶分子以及参与调节它们的功能。并且由于具有比抗体更高的特异性,合成方便,无免疫原性反应,长期稳定性等许多优点,从而可替代抗体使用。本研究通过筛选得到了两条核酸适配体,这两条核酸适配体均能够与α-鹅膏毒肽高特异性强亲和力的结合,它们可用作α-鹅膏毒肽检测分析的工具。本文采用核酸适配体的SELEX筛选技术,以α-鹅膏毒肽作为靶蛋白,以亲和填料Epoxy-activated sepharose 6B作为筛选介质,从体外合成的随机单链寡核苷酸文库中筛选其核酸适配体。经过12轮的筛选,将最终筛选产物进行克隆测序,对获得的核酸适配体进行分析,二级结构预测分析表明,茎环和G-四链结构为其主要的结构形式,圆二色谱法的鉴定提示其可能是适配体与α-鹅膏毒肽特异性结合的基础。基于筛选出来的α-鹅膏毒肽核酸适配体,我们建立了一种新型的酶联寡核苷酸检测方法—ELONA (Enzyme Linked Oligonucleotide Assay)法,通过此方法对得到的核酸适配体进行特异性和灵敏度的检测,其中E06和H06核酸适配体的特异性以及灵敏度最好,该研究为快速准确检测蘑菇中α-鹅膏毒肽的残留奠定了实验基础。