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背景及目的类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性、多关节炎为主要表现的慢性全身性自身免疫性疾病,关节的慢性炎症导致软骨和骨质的破坏,进而可导致关节畸形。关节骨质破坏是关节畸形的重要因素,而破骨细胞是引起骨破坏的关键细胞之一。10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,10-HCPT)源之于植物珙桐科喜树提取物,最先用于肿瘤治疗,研究证实10-HCPT的肿瘤治疗作用与DNA拓扑异构酶I(Topoisomerase I,Topo-I)关系密切,DNA拓扑异构酶类是广泛存在于生物体内调节DNA空间构型的动态变化,并直接参与和/或影响DNA的复制和转录。10-HCPT通过氢键和分子之间的疏水作用与Topo-I和DNA的化合物结合时,形成相对稳定的三元复合物,由此可以抑制Topo-I的活性,阻断DNA的复制,最后导致细胞凋亡。而RA具有类似于“局部恶性肿瘤”的增生性和破坏性的特点,且我们前期研究证实10-HCPT能够抑制类风湿关节炎患者外周血Th17细胞的功能和成纤维样滑膜细胞的增殖,但目前尚无文献报道10-HCPT是否对致关节畸形的破骨细胞具有抑制作用。RAW264.7细胞是小鼠单核巨噬细胞,与核因子κB配体(Receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,M-CSF)共诱导培养,可分化为破骨细胞,是体外研究破骨细胞的一个经典方法。本实验通过体外培养RAW264.7细胞与RANKL和M-CSF共培养,添加不同溶度的10-HCPT,研究10-HCPT对RAW264.7细胞分化为破骨细胞的影响。方法1、细胞培养:体外培养RAW264.7细胞,与RANKL和M-CSF共诱导培养。2、实验分组:分别用不同浓度的10-HCPT处理细胞,空白对照组仅RAW264.7细胞。3、CCK-8法:设置不同浓度梯度10-HCPT处理细胞,检测细胞活性。4、TRAP染色:根据TRAP染色试剂盒说明书操作,将细胞固定和染色。计数TRAP阳性破骨细胞。5、实时荧光定量PCR:检测不同浓度10-HCPT处理下破骨细胞相关标志基因CTSK、TRAP和MMP-9 mRNA的表达。6.、统计学分析:采用SPSS 20.0软件及GraphPad prism 5进行统计分析和图表生成。结果1、10-HCPT对细胞活性的影响:10-HCPT浓度分别为1ng/ml、2ng/ml和5ng/ml与不加10-HCPT的细胞活性相比无明显差异(P>0.05)。2、10-HCPT对RAW246.7细胞形成破骨细胞的影响:添加RANKL和M-CSF的对照组和实验组,可见大的多核破骨细胞。加入不同浓度10-HCPT(1、2、5ng/ml)后随着药物浓度增高,破骨细胞数目明显减少(P<0.05)。3、实时定量荧光PCR结果示:10-HCPT能显著降低TRAP、CTSK和MMP-9基因的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且随着浓度的增加,这种抑制效果更加明显。结论10-HCPT可以减少破骨细胞标志性基因的表达及破骨细胞的形成。