蛋白激酶C-βⅡ对人原发性肝癌细胞影响的实验研究

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【目的】研究观察蛋白激酶C-βⅡ对人原发性肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响。【方法】本实验采用两部分进行即体外部分和体内部分。体外实验:体外培养人原发性肝癌细胞(PHC)SMMC-7721细胞,质粒(PKCβⅡ)大量制备,脂质体介导基因体外转染,应用细胞计数、蛋白激激酶C-βⅡ测序、细胞形态学观察、MTT法、流式细胞仪(FACS)检测技术等方法研究PKCβⅡ对人原发性肝癌细胞的影响,并进行统计学分析。体内实验:3至4周Nu/nu系健康裸鼠30只,随机分成空白组、对照组、实验组。在30只裸鼠背部注射入人原发性肝癌细胞SMMC-7721细胞,使其背部长出肿瘤,并分别注射入生理盐水、pcDNA3、PKCβⅡ,隔天注射一次,并记录每次肿瘤的大小,待注射药物十五次后,处死裸鼠,取裸鼠背部肿瘤,4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片,应用细胞周期素D1(Cyclind1)、基质分解素-1(MMP3)、基质金属蛋白水解酶-9(MMP9)抗体进行免疫组化。对肝癌肿瘤视野内CyclinD1、MMP3、MMP9阳性表达进行观察。【结果】体外实验:细胞计数的生长曲线表明转导入PKCβⅡ的人原发性肝癌细胞SMMC-7721细胞数目明显增加;经查阅相关资料蛋白激激酶C-βⅡ测序结果吻合率达到99.8%;MTT法显示转染PKCβⅡ的人原发性肝癌细胞SMMC-7721的OD值增加,细胞数目显著增加(p<0.01);细胞形态学观察转导入PKCβⅡ的人原发性肝癌细胞SMMC-7721细胞间连接紧密,巨核、双核、多核、奇异型的核也明显增加,核分裂像增多,特别是出现不对称、多极性及顿挫性等病理性核分裂像尤为明显;流式细胞仪检测显示转染PKCβⅡ的SMMC-7721细胞凋亡率明显降低。体内实验:注射入PKCβⅡ的裸鼠背部肿瘤逐渐扩大,而其它两组肿瘤大小变化不大,免疫组化显示注射入PKCβⅡ的瘤块。【结论】PKCβⅡ促进人原发性肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖,抑制凋亡。
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