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研究背景与目的乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染是全世界常见的病毒感染之一,对人类的健康构成了严重的威胁。HBV急性感染后,约有10%的成人发展成慢性感染,而慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)是导致肝硬化、肝衰竭和肝癌发生的主要原因。通常认为,宿主的免疫特性是影响HBV感染后转归的关键因素。锌指蛋白A20作为NF-κB的抑制因子,在炎症和免疫反应中扮演重要角色。已有相关文献报道,A20在系统性红斑狼疮和慢性丙型病毒性肝炎等免疫炎症性疾病中有重要作用,然而A20在CHB患者中的表达改变及意义却鲜有研究。所以,本研究旨在检测CHB患者外周血和肝组织中A20的表达水平,并初步探讨其在CHB发病过程中的作用及意义。研究方法本实验共纳入136例CHB患者和30例健康对照(health controls, HCs)作为研究对象。根据免疫状态的不同,CHB患者分为免疫耐受期16例、免疫清除期80例、低复制期15例、免疫再活动期25例。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)方法检测CHB患者及健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs) 中A20, TNF-α,NF-κB p65 and TLR4 mRNA表达水平。应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)方法检测26例行肝穿刺活检术的CHB患者及6例健康肝移植供者的肝组织内A20蛋白的定位及表达。我们采用SPSS 19.0软件进行统计学分析,数据分布应用Kolmogorov-Smirnov检验,数据资料用中位数(下四分位数,上四分位数)或数字表示,采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis检验或卡方检验进行组间比较,采用Spearman等级相关分析进行相关性分析。P<0.05认为差异具有统计学意义。结果1.CHB患者PBMCs中A20 mRNA的水平明显高于HCs组(P<O.001),在HBeAg阳性组和HBeAg阴性组CHB患者中A20mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。2.CHB患者PBMCs中A20 mRNA的水平与谷丙转氨酶(r=0.680,P<0.001)、谷草转氨酶(r=0.656,P<0.001)和总胆红素(r=0.326,P<0.001)呈明显正相关,与其他一些指标如HBV-DNA、HBsAg、白蛋白均不具有相关性。3.免疫清除期、免疫再活动期患者PBMCs中A20 mRNA的表达均明显高于免疫耐受期、低复制期、HCs组(P<0.05)。免疫清除期与免疫再活动期患者A20mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期、低复制期、HCs组A20mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。A20 mRNA用于区分免疫耐受期与免疫激活期的最佳诊断截点为4.19,敏感性是71.25%,特异性是81.25%,受试者工作特性曲线(receiver operating characteristic, ROC)下面积是0.831(95%CI：0.741-0.900,P<0.001)；区分免疫再活动期与低复制期的最佳诊断截点为3.97,敏感性是92.0%,特异性是86.67%,ROC下面积为0.927(95%CI：0.798-0.985,P<0.001)。4.A20蛋白主要在CHB患者肝组织胞浆中表达。与正常肝组织相比,CHB患者肝组织中A20蛋白明显升高,并随肝脏炎症程度增高而增多。5.CHB患者PBMCs中TNF-α、NF-κB p65mRNA的表达均高于HCs(P<0.001),而TLR4 mRNA则显著低于HCs(P<0.001)。另外,CHB患者PBMCs中A20 mRNA的表达与TNF-α、NF-κB p65 mRNA呈正相关(r=0.245,P<0.05;r=0.446,P<0.001),与TLR4 mRNA水平呈负相关(r=-0.191,P<0.05)。结论A20在CHB患者外周血和肝组织中的表达均明显增高,并与病情严重程度成正相关,提示A20可能在乙型病毒性肝炎慢性化感染进程中起到重要作用。