胚胎着床是具有活性的囊胚与可接受子宫建立联系的过程,是影响妊娠过程的主要环节。这个过程受到许多的因素调控,而miRNA也参与了这个过程的调控。本试验以妊娠早期第9天、12天和15天以及空怀12天猪子宫内膜为研究对象,每个阶段3个生物学重复,进行miRNA高通量测序。研究结果如下:1.通过高通量miRNA测序,妊娠不同阶段比较后共获得106个差异miRNA。我们在妊娠9天与空怀12天子宫内膜中没有发现差异表达的miRNA,表明miRNA可能没有参与妊娠9天子宫内膜与空怀12天子宫内膜的差异调控。2.妊娠12天与空怀12天子宫内膜中只有一个差异miRNA,而之前研究发现妊娠12天与空怀12天猪子宫内膜存在差异表达基因,这表明miRNA对娠12天与空怀12天猪子宫内膜差异的调控作用较弱。3.妊娠15天与空怀12天子宫内膜相比较,共发现52个差异表达的miRNA。这表明妊娠15天子宫内膜与空怀12天子宫内膜相比具有较大的差异,而这些差异受到miRNA调控。4.妊娠12天与妊娠9天子宫内膜之间,妊娠15天与妊娠12天子宫内膜之间以及妊娠15天与妊娠9天子宫内膜之间得到较多的差异miRNA,这些差异miRNA参与调控胚胎着床过程中的多个分子事件。5.通过生物信息学分析发现,miRNA通过参与信号、信号传导、生物学过程调控、细胞过程调控等生物学过程,以及受体活性、信号受体活性、蛋白绑定、金属离子绑定等分子功能来调控胚胎着床。6.KEGG通路富集分析发现,miRNA通过已知的几个信号通路如:Wnt信号通路、MAPK信号通路、刺猬信号通路参与胚胎着床。同时还显著富集发现其他一些信号通路,表明miRNA也通过这些信号通路来参与胚胎着床。7.在妊娠12天与妊娠9天子宫内膜中,妊娠15天与妊娠12天子宫内膜中miR-152都上调表达,靶基因预测发现ESR1是miR-152的一个潜在靶基因。我们构建了ESR1 3’UTR双荧光报告载体,分别用ESR1 3’UTR双荧光载体和miR-152以及ESR1 3’UTR双荧光载体和NC共转染PK-15细胞。结果显示ESR1 3’UTR+miR-152组荧光值比ESR1 3’UTR+NC组极显著下调,证实了ESR1是miR-152的一个潜在靶基因。