【摘 要】
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目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)内
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目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白量减少。方法:建立原代HUVEC的培养条件,用CD31和Ⅷ因子免疫荧光法判断细胞纯度;选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;给予溶酶体抑制剂氯化氨(NH4Cl)、caspase抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/m L)共同处理细胞24 h,Western blot法检测HUVECs中eNOS蛋白表达水平。结果:HUVEC细胞纯度符合实验要求;与未加入TNF-α的对照组相比较,HUVECs eNOS蛋白量随TNF-α干预时间的延长和作用浓度的增加而减少;MG-132与TNF-α共同处理组,eNOS蛋白量明显增加。结论:TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起了eNOS蛋白降解。
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