【摘 要】
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目的:探讨苦参碱增强顺铂对人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞株Huh7移植瘤裸鼠的抑制作用及相关分子机制。方法:（1）BALB/c裸鼠腋部皮下注入人HCC细胞株Huh7以此构建异种移植模型模型。在成瘤后,将24只裸鼠随机分4组（每组6只）:空白组（生理盐水10ml/kg）、苦参碱组（苦参碱100mg/kg）、顺铂组（顺铂2mg/kg）、联合组（苦参碱100m
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目的:探讨苦参碱增强顺铂对人肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞株Huh7移植瘤裸鼠的抑制作用及相关分子机制。方法:（1）BALB/c裸鼠腋部皮下注入人HCC细胞株Huh7以此构建异种移植模型模型。在成瘤后,将24只裸鼠随机分4组（每组6只）:空白组（生理盐水10ml/kg）、苦参碱组（苦参碱100mg/kg）、顺铂组（顺铂2mg/kg）、联合组（苦参碱100mg/kg+顺铂2mg/kg）,各组均按体重通过腹腔注射给药,隔天1次,7 d为1疗程,给药2个疗程。（2）观察各组瘤体生长状况,给药结束次日处死裸鼠,剥离瘤体,测量每个肿瘤组织大小并称重,对比瘤体体积及瘤重变化情况,计算各组抑瘤率。（3）使用免疫组化法检测瘤体CD34抗体在肿瘤血管内皮细胞的表达测定微血管数,计算并比较各组微血管密度（microvascular density,MVD）的大小,通过Western blot及免疫荧光法测定各组瘤组织中环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase2,MMP2）的表达,分析裸鼠瘤组织中COX-2、MMP2的表达分别与CD34-MVD的相关性。（4）使用SPSS 24.0软件统计分析所得的实验数据,所有数据均进行正态分布检验。正态分布数据两组间比较采用两组独立样本t检验,多组间比较用ANOVA分析比较,两组间使用Pearson相关系数进行相关性分析;非正态分布数据采用秩和检验分析比较,其两组间使用Spearman秩相关系数进行相关性分析,所有统计学分析均为双侧,所有计量资料均用均数±标准差（（?）±s）表示,P＜0.05差异有统计学意义。结果:（1）与空白组相比,联合组、顺铂组和苦参碱组均能够减低肿瘤体积、瘤重,其抑瘤率分别为44.67%±6.40%、57.17%±13.90%、81.00%±18.60%,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）免疫组化结果提示空白组CD34-MVD表达最高,苦参碱组、顺铂组、联合组CD34-MVD表达均下降,而联合组CD34-MVD表达最低（P＜0.05）。（3）Western blot分析显示,与空白组相比,苦参碱组、顺铂组、联合组瘤组织中COX-2、MMP2的表达均下降（P＜0.05）,且联合组的COX-2、MMP2的表达均低于苦参碱组和顺铂组（P＜0.05）。（4）免疫荧光结果显示,COX-2主要定位在Huh7 HCC细胞浆中,MMP2主要定位在细胞浆、细胞膜中。COX-2、MMP2在空白组中高表达,其次为顺铂组和苦参碱组,联合组表达最低（P＜0.05）。（5）在所有瘤组织中CD34-MVD与COX-2、MMP2的表达呈正相关性,其相关系数r分别为0.634、0.606,且P值均小于0.05,差异有统计学意义,同时,MMP2和COX-2之间的表达也彼此具有正相关性,r=0.866,P＜0.001。结论:（1）苦参碱联合顺铂对HCC细胞具有协同抑癌作用。（2）在HCC Huh7荷瘤裸鼠的癌组织中COX-2、MMP2的表达与CD34-MVD的表达呈正相关,推测COX-2、MMP2可能是HCC重要促血管生成因子。（3）苦参碱增强顺铂抑制HCC血管生成分子机制可能是降低COX-2、MMP2的表达水平,以抑制癌细胞生长和侵袭。
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