研究背景： 大量研究表明原发性肝细胞癌(HCC，肝癌)发生是一个多基因、多途径的复杂多阶段过程，基因的点突变、扩增、移位、重排及病毒基因的插入，引发原癌基因的激活和抑癌基因的失活，是肝癌发生的核心生物学过程。同时，肝癌的发生是遗传和环境因素相互作用的结果，遗传决定了个体遗传易感性，而环境因素决定了什么样的易感个体患癌。 肿瘤遗传易感性最明显的临床特征是家族史，即在同一个家族的数代中，有多位肿瘤患者。遗传性和散发性肿瘤都关系到同一组癌相关基因，体细胞癌相关基因突变及其积累的速度，使具有不同遗传多态性的个体，有不同中、低程度的肿瘤易感性。因此，肿瘤家族的临床鉴定近年受到重视，癌家族可作为遗传易感性的一种指标，同时还有助于阐明肿瘤病因、临床处理、遗传咨询以及癌相关基因的鉴定。 流行病学调查和遗传学研究均显示：在原发性肝细胞癌家系中，乙型肝炎病毒(HBV)感染也呈家庭聚集现象，HBV与肝癌有密切关系。实验研究结果证实：HBV DNA编码的乙肝病毒X蛋白(HBx)在HBV致癌过程中发挥着关键性的作用。HBx具多项功能，通过影响Wnt信号转导途径，在肝癌的发生机制中起到重要的作用。在肝癌组织中和癌旁组织中有多个Wnt信号途径基因表达异常、基因突变。 β—catenin基因定位于人染色体3p21-22，基因全长23.2kb，有16个外显子，编码β—联蛋白。β—联蛋白是Wnt途径的决定性成分。β—catenin、轴蛋白(AXIN)基因的突变能阻止β—联蛋白的下调，激活Wnt途径。对人肝癌组织和癌旁组织的研究可检测到β—catenin基因变异且存在于exon3的condons32～45之间。 但是既往研究或仅局限于作HBV、HCC的流行病学和(或)遗传病学调查分析，或者仅专注于肝癌组织及癌旁肝组织广泛基因筛查、蛋白表达的差异，所研究的病理样本来源患者之间互无遗传学/血缘关系，所筛查出的基因不一定互有关联，也不能判断筛出的相关基因变异是仅局限于肝脏组织，由HBx诱导产生，还是在HCC发生前就已经存在的？宿主遗传基因多态性对个体发生HCC的危险度的影响？即具有那些遗传背景的个体在慢性HBV感染情况下更易发生HCC。 研究目的： 把病毒学和肿瘤遗传学结合起来，通过针对有肝癌家族史和无肝癌家族史的乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌患者匹配，探讨β—catenin宿主基因多态性与肝细胞癌发生、发展的关系，寻找β—catenin基因序列中是否存在HBV相关HCC遗传学标志—基因突变位点。 研究方法： 1、对符合病例入选标准，不含排除标准中因素的乙肝相关性肝细胞癌患者进行家系和流行病学调查，从中挑选出有肝癌家族史的患者和与其流行病学因素一致但无肝癌家族史的匹配者共24例(包括12例有肝癌家族史病例和12例与之相匹配的无肝癌家族史病例)。病例外周血样本进行以下实验步骤。 2、从外周血液标本中提取人基因组DNA。 3、针对β—catenin基因外显子3(exon3)所在DNA片段设计并合成引物。 4、进行PCR扩增。 5、PCR扩增产物目的条带琼脂糖凝胶中切胶和回收。 6、回收纯化产物进行的基因测序。 7、统计分析，比对测序结果和患者的家系调查结果。 研究结果： 对入选的24例患者进行外周血中人DNA基因组提取后对目的片段进行了扩增，PCR反应产物电泳结果在紫外线摄像仪照相可见目的条带清楚，扩增产物大小符合796bp，DNA提取和DNA扩增的成功率达100％。切胶回收后在2％琼脂糖凝胶上电泳结果样本的杂带已经消失，呈现单一目的条带且清晰。24份样本送基因测序均得到清晰的测序图谱，样本测序成功率为100％，得到各样本所需研究分析的β—catenin基因exon3序列。 对测序结果进行分析比对可见，所有患者在SNP rs28931588、rs28931589位点均为“G”。有3例患者(A8、A24、A23)测序结果与NCBI网站Genebank相关网页显示的序列存在多个位点的突变：A24 condons33，37和41；A8condons35，37，39，40，41，43，44，45和46；A23 condons32，37，39，43。 研究结论： 1、本课题是首次专门在中国南方地区乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌患者中，通过有和无肝癌家族史患者匹配、由外周血提取人基因组DNA来研究该地区β—catenin的宿主基因多态性与肝细胞癌易感的关系。 2、乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌患者中，无论有或无家族史者，在SNP rs28931588、SNP rs28931589发生频率都低，可能非这类肝癌的遗传学标志。 3、乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌患者在exon3的condons31～46之间序列具有宿主基因多态性。但是未见特异性的突变位点。 4、宿主β—catenin基因exon3多态性发生与肝癌患者的病程分期无关。