目的：　　探索Toll样受体4(Toll Like Receptor，TLR)-4在“干细胞（上室）-成骨细胞（下室）”共培养体系中对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrowmensenchymal stem cells，BMSCs)向破骨细胞分化的影响及机制。　　方法：　　以Percoll密度梯度离心法分离大鼠BMSCs，常规培养、传代，镜下观察细胞形态。取第3代活力良好的细胞以流式细胞技术检测经典干细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90，鉴定干细胞。取孔径为8μm的Transwell小室，将第3代活力良好的BMSCs制成细胞悬液（密度为1×107/ml）置于共培养小室的上室;将由大鼠BMSCs诱导分化而来的大鼠成骨细胞株进行培养、传代并鉴定后，取活力较好的第3代细胞制成细胞悬液（密度为1×107/ml）置于共培养小室的下室，构建“干细胞-成骨细胞”共培养体系。将构建完成的“干细胞-成骨细胞”共培养体系分为TLR-4激活组和空白组，前者上室中加入TLR-4激动剂脂多糖(10ng/ml)，后者上室中加入等体积PBS缓冲液，两组的上室中均加入破骨细胞诱导培养基进行培养。培养第6天，分别取TLR-4激活组和空白组上室细胞制成细胞爬片，进行抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acidphosphatase，TRAP)染色，染色阳性认为是破骨细胞，比较两组上室破骨细胞数目。在培养第6天，分别取2组下室细胞悬液，以β-肌动蛋白作为内参，蛋白质印迹法（Western blot法）检测并比较核因子κB受体活化因子配体(Receptoractivator for nuclear factor-κB ligand，RAKL)的蛋白表达。　　结果：　　Percoll密度梯度离心法获得细胞，镜下观察原代细胞由最初的散在的非贴壁细胞逐渐形成集落并贴壁，形态由小圆形淋巴细胞样转变为纤维细胞样。经流式细胞技术鉴定，细胞表面标志物表达为CD34阴性，CD44阳性，CD54阳性，CD90阳性，符合BMSCs细胞表面标志物表达特征。细胞在“干细胞-成骨细胞”共培养体系中经干预措施处理后，TRAP染色结果显示，TLR-4激活组上室中破骨细胞数目（55.83±2.44个）多于空白组上室细胞中破骨细胞数目（37.50±2.20个），结果差异有统计学意义（t=13.556，P＜0.05）。Western blot法检测结果显示，TLR-4激活组RANKL的蛋白表达较空白组RANKL的蛋白表达更为明显，定量分析显示差异具有统计学意义(t=17.630，P＜0.05)。　　结论：　　在“干细胞-成骨细胞”共培养体系中，激活TLR-4能够促进干细胞向破骨细胞分化，其机制可能与TLR-4促进成骨细胞分泌RANKL有关，上调的RANKL与干细胞表面的核因子κB受体活化因子（Receptor activator for nuclear factor-κB，RANK）作用，通过RANKI/RANK通路促进干细胞向破骨细胞分化。