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研究目的: (1)研究恶性血液病细胞株(K562/A02、K562、U266、RPMI-8226、HL60、Raji)孕烷X受体(Pregnane X receptor)的表达高低; (2)探讨藤黄酸(Gambogic acid, GA)对K562/A02耐药细胞株的耐药逆转作用及其作用机制。 方法: (1) Real-time PCR法检测多个恶性血液病细胞株中PXR的表达 (2)采用溴化3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑(MTT)法检测K562/A02细胞株分别与GA，DNR，GA+DNR孵育24 h、36h和48 h后细胞的增殖抑制率; (3)流式细胞术检测对照组、单加GA组、单加DNR组和GA+DNR组细胞的凋亡率; (4)流式细胞术检测对照组、单加DNR组和GA+DNR组细胞中DNR浓度; (5) DAPI染色观察对照组、单加GA组、单加DNR组和GA+DNR组对K562/A02细胞形态的影响 (6)蛋白印迹(Western blot)法检测各实验组细胞PXR蛋白的表达水平。 结果: (1) Real-time PCR提示K562/A02细胞中PXR的表达水平为13.670±0.046，明显高于其他各系细胞(K562:1.00±0.873，U266:7.205±0.459，RPMI-8226:2.828±0.928，HL60:1.364±0.038，Raji:0.766±0.249)，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (2) GA联合DNR作用于K562/A02耐药细胞株24 h、36 h和48 h后，与单加DNR组相比细胞增殖抑制率明显增加，细胞内柔红霉素浓度明显增加，细胞凋亡率明显升高，提示GA可以逆转K562/A02细胞对DNR的耐药。 ①DNR单药作用于K562/A02耐药细胞株48 h后测得DNR的IC50值为(26.48±0.98)μg/mL; ②当GA浓度≤0.4μmol/L时，对K562/A02细胞的增殖无明显抑制作用，细胞抑制率在24 h、36 h和48 h均＜10％。 ③将0.4μmol/L GA联合不同浓度DNR作用于K562/A02细胞株48h后，所测得DNR的IC50值为(18.01±1.06)μg/mL;与DNR单药组相比，细胞增殖抑制的差异有统计学意义(P＜0.05)，耐药逆转倍数为1.47。 ④DAPI染色结果显示:单加DNR组可见部分细胞核呈现凋亡特征，如染色质浓缩;GA+DNR组细胞凋亡明显增强，产生凋亡小体。而单加GA组与对照组相比较，细胞的形态变化不明显。 ⑤流式细胞仪检测结果显示GA联合DNR与K562/A02细胞作用48 h后，其细胞内DNR浓度较单用DNR组增加，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 ⑥流式细胞仪术检测各实验组细胞孵育48 h后的凋亡率，结果示DNR+GA组凋亡率较单用DNR组及单用GA组均升高，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (3)Real-time PCR提示:GA单药组及GA+DNR组中PXR的表达水平分别为0.076±0.008和0.033±0.007，明显低于对照组(1.00±0.183)和DNR组(3.099±0.874)，差异具统计学意义(P＜0.05)。对照组及单加柔红霉素组表达差异无明显统计学意义(P＞0.05)。 (4)Western blot法结果示: GA+DNR组与GA组的PXR蛋白表达较对照组及DNR组均显著下调(P＜0.05)，但两者间无明显统计学差异(P＞0.05)，DNR组与对照组的PXR蛋白表达亦无明显统计学差异（P＞0.05）。 结论: (1) PXR可在多株恶性血液病细胞株中表达，其中在K562/A02细胞株中的表达较其他细胞高; (2)小剂量的GA联合DNR可以增强对细胞抑制率，增加化疗效果，其机制可能与下调PXR表达、增加细胞内DNR药物浓度、促进细胞凋亡相关; (3)经GA处理过的K562/A02细胞株，PXR基因及蛋白表达均较未处理组及DNR组下降，提示小剂量GA可以下调PXR的基因及蛋白表达。