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长期以来化学肥料使用量增长而有机肥料使用不足,造成土壤养分比例失调,土地板结、质量下降,河流及地下水污染等一系列问题。不产氧光合细菌因具有复杂代谢功能和代谢产物,被广泛应用在农业种植、水产养殖、废水处理、新能源生产、生物肥料等众多领域。不产氧光合细菌大都具固氮能力,能提高土壤氮素水平,促进土壤物质转化,改善土壤结构,提高土壤肥力,促进作物生长;通过其代谢活动能有效地提高土壤中某些有机成分、硫化物、氨态氮含量,促进农药、化肥等污染物的转化;其产生的丰富的生理活性物质如脯氨酸、尿嘧啶、胞嘧啶、维生素、辅酶Q、类胡萝卜素等都能被植物直接吸收,有助于改善作物营养,激活植物细胞的活性,促进根系发育,提高光合作用和生殖生长能力;其含有的抗细菌、抗病毒物质能钝化病原体的致病力且抑制病原体生长,抑制丝状真菌等有害菌群生长,同时还能促进放线菌等有益微生物增殖,从而有效地抑制某些植病的发生与蔓延。不产氧光合细菌肥料作为微生物肥料的一种,已被证明其安全性、优质性,在农业上发挥着优质增产的功效,因此具有巨大的开发潜力。 本研究旨在富集筛选具有农业应用价值且易于培养的不产氧光合细菌,并对其制剂在盆栽作物上的应用效果做出评价,结果如下: (1)对水田土壤中好氧及兼性厌氧的不产氧光合细菌进行富集培养、分别采用稀释平板涂布培养法和倾注厌氧培养法,30℃下光照培养,挑取长势较好并且具有不同特征的菌落用平板划线法进行反复传代培养,直至菌落的形状、颜色、透明度一致。通过简单染色和镜检,确定纯度,共分离纯化得到4株菌;采用光照强度耐受性试验,筛选出在10001x、30001x和50001x等3种光照强度下长势均为最佳的sbg11菌株作为出发菌株。 (2)通过形态观察和理化特性试验,结果表明菌株sbg11革兰氏染色呈阴性,单细胞为短杆状,菌体大小为0.4~0.7×1.2~2.7μm,二分分裂繁殖,菌落呈深红色点状,兼性好氧生长;菌体富含细菌叶绿素a和类胡萝卜素;能利用D-葡萄糖、D-甘露糖等多种碳源;pH范围4~10,耐4.0%NaCl;对氨苄青霉素(300μg·mL-1)、庆大霉素或新霉素(50μg·mL-1)、卡拉霉素或链霉素(5μg·mL-1)有耐受性,对氯霉素、四环素、红霉素敏感;菌株sbg11能产生吲哚、分泌生长素、液化明胶和还原NO3-,不能生成H2S。16S rDNA序列分析结果表明,菌株sbg11与胶状红长命菌(Rubrivivax gelatinosus)相似性为99%。 (3)菌剂培养基及发酵条件优化试验表明,菌株的最适pH为7.0、最佳培养温度30℃、合适光照强度30001x。以1%乙酸钠、1%黄豆粉分别代替RCVBN培养基中碳、氮源为最佳培养基;以10%接种量接种于初始pH7.0的发酵培养基中,100 r·min-1转速下,30℃培养72 h为最优发酵条件。 (4)sbg11不产氧光合细菌菌剂在盆栽生菜上的应用效果显示,该菌剂处理与营养液处理、化肥处理和清水处理相比,生菜的硝酸还原酶活性、氮磷钾含量、叶绿素和维生素C含量的积累等方面起到了促进作用,并在一定程度上提高了生菜干重产量和可溶性总糖含量,改善了生菜品质。