目的:探索及完善精原干细胞的分离、鉴定和体外培养技术;研究原癌基因c-src在体外培养的大鼠精原干细胞中的表达及其与精原干细胞增殖相关的信号通路。方法:用非连续密度梯度离心及差速贴壁法分离精原干细胞;用抗端粒酶逆转录酶免疫细胞化学(TERT)鉴定精原干细胞;用MTT比色法观察反义c-src脱氧寡核苷酸(反义c-src ODNs)对精原干细胞增殖的量效关系及时效关系;用RT-PCR检测原癌基因c-src mRNA的表达情况;用western blot检测c-Src蛋白、磷酸化的ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)和磷酸化的STAT3蛋白(p-STAT3)的表达情况。结果:非连续密度梯度离心及差速贴壁法分离的精原干细胞,其TERT免疫细胞化学阳性细胞数平均值为90.5 %;与空白对照组相比,10μmol/L反义c-src ODNs组作用12 h后精原干细胞的增殖抑制率为12.6%(P<0.05),且c-src mRNA水平明显下调(P<0.05);western blot结果显示反义c-src ODNs组c-Src蛋白、p-STAT3蛋白和p-ERK1/2蛋白的表达与空白对照组相比分别下降了33.8 %(P<0.01),45.3 %(P<0.01)和38.4 %(P<0.01)。结论:非连续密度梯度离心结合差速贴壁法是分离精原干细胞的有效方法;TERT免疫细胞化学证实本实验所获得的细胞是高纯度的精原干细胞;原癌基因c-src可以促进精原干细胞的增殖;c-Src蛋白可能通过p-STAT3蛋白和p-ERK1/2蛋白而起作用。